13. Transformacja u bakterii
Cel ćwiczenia
•
Wywołanie sztucznej transformacji u Escherichia coli przy przy pomocy plazmidu pGLO
stosując duże stężenie soli w połączeniu z szokiem cieplnym (transformacja chemiczna)
•
Obliczenie wydajności transformacji
Transformacja
•
Proces, podczas którego komórka biorcy pobiera wolny DNA z otaczającego środowiska
•
Transformacja naturalna (zachodząca w środowisku naturalnym) i sztuczna (przeprowadzana w laboratorium przy zastosowaniu specjalnych zabiegów jak szok chemiczny lub spowodowany polem elektrycznym - elektropolacja )
•
Aby mogła zajść transformacja osobniki muszą uzyskać tzw. stan kompetencji czyli zdolność do pobrania DNA
•
Proces pobierania DNA może być podzielony na dwa etapy: wiązanie DNA z powierzchnią komórki i przechodzenie przez osłony komórkowe
Plazmidy
•
Dodatkowy fragment DNA zazwyczaj kolisty (może być też liniowy), znacznie mniejszy od chromosomu bakteryjnego zdolny do niezależnej replikacji
•
Mogą kodować różne funkcje np. oporność na antybiotyki (plazmidy opornościowe R), elementy strukturalne, systemy transportu w błonie komórkowej, zdolność przenoszenia się z jednej komórki do drugiej w procesie koniugacji.
•
Są powszechnie stosowane w biologicznych technikach związanych z otrzymywaniem zrekombinowanego DNA.
•
Stanowią wygodny nośnik umożliwiający nabycie nowych cech przez bakterie np.
wykorzystanie nowych źródeł węgla czy cechy oporności na antybiotyki i inne toksyczne substancje
Schemat transformacji przeprowadzonej w czasie ćwiczenia
GFP - gen kodujący białko fluoryzujące na zielono
bla - gen kodujący białko powodujące odporność na antybiotyk czyli Beta-lactamazę araC -gen kodujący białko regulatorowe
Ori - origin replikacji czyli początek replikacji
Świecąca meduza Aequorea victoria