ĆWICZENIE III
I
METODY OZNACZANIA OGÓLNEJ LICZBY DROBNOUSTROJÓW:
1. Metody bezpośrednie – mikroskopowo w komorze Thoma, metodą Breeda oraz przy
pomocy filtrów membranowych.
2. Metody pośrednie – posiew i liczenie kolonii metodą zalewową, posiew powierzchniowy, oznaczenie najbardziej prawdopodobniej liczby drobnoustrojów (NPL).
3. Metody wskaźnikowe – oznaczanie miana.
II
MORFOLOGIA GRZYBÓW STRZĘPKOWYCH
Zygomycota
Cechy charakterystyczne:
• Grzybnia (mycelium) jednokomórkowa, zawierająca wiele jąder
• Rozmnażanie wegetatywne - w zarodni powstają jednokomórkowe zarodniki -
endospory (okrągłe lub owalne)
• Rozmnażanie generatywne – zlanie się dwóch odcinków różnych nitek tej
samej grzybni (gamentangia), po ich połączeniu powstaje zygospora, która
kiełkuje w sporangiofor, na końcu którego znajduje się zarodnia.
Przedstawiciele:
Mucor sp. : A – zarodnia z zarodnikami
B – różne kształty kolumeli
Ascomycota
Cechy charakterystyczne:
• Wielokomórkowa grzybnia
• Rozmnażanie wegetatywne – z grzybni wyrasta strzępka owocująca -
konidiofor, zarodniki zewnętrzne – konidia (egzospory)
• Rozmnażanie płciowe – wytworzenie worka (ascus) z zarodnikami
workowymi (ascospory)
• Drożdże bezpłciowo rozmnażają się przez pączkowanie, natomiast
płciowo przez zarodniki (ascospory)
Przedstawiciele:
Chaetomium globosum: a)perytecjum, b) worki z zarodnikami, c) zarodniki
Deuteromycota (Fungi Imperfecti)
Cechy charakterystyczne:
• Grzyby u których nie stwierdzono rozmnażania płciowego
• Grzybnia składająca się ze strzępek rozgałęzionych, wielokomórkowych
• Rozmnażanie wegetatywne – wytwarzanie konidiów lub oidiów –
powstających z rozpadu strzępek
Przedstawicele:
Trichoderma sp.
2. Znaczenie pleśni i drożdży w przemyśle spożywczym
Część praktyczna
1. Oznaczanie liczby komórek drożdży piekarskich Saccharomyces cerevisiae w komorze Thoma:
a) po ustawieniu oświetlenia w mikroskopie należy znaleźć siatkę komory, najpierw pod obiektywem o powiększeniu 10 x, a następnie 40 x,
b) otrzymaną zawiesinę drożdży wytrząsać przez kilka minut, następnie przenieść szybko pipetą do komory Thoma,
c) obliczyć średnią liczbę komórek w ok. 40 małych kwadracikach, (w sumie ok. 700
komórek),
d) wyliczyć liczbę komórek w 1 cm3 badanej zawiesiny drożdży.
2. Wykonanie testu na żywotność i odżywienie drożdży
Żywotność
a) na szkiełko przedmiotowe nanieść kroplę zawiesiny drożdży
b) dodać kroplę błękitu metylenowego, delikatnie wymieszać,
c) przykryć preparat szkiełkiem nakrywkowym,
d) oglądać pod mikroskopem przy użyciu obiektywu o pow. 40x
e) policzyć martwe komórki w polu widzenia mikroskopu (komórki martwe barwią się na
kolor szafirowo-niebieski, żywe są bezbarwne)
Odżywienie
a) na szkiełko przedmiotowe nanieść kroplę zawiesiny drożdży
b) dodać kroplę płynu Lugola, delikatnie wymieszać,
c) przykryć preparat szkiełkiem nakrywkowym,
d) oglądać pod mikroskopem przy użyciu obiektywu o pow. 40x
e) policzyć komórki z brunatnymi ziarnistościami (glikogen) w polu widzenia mikroskopu
3. Obserwacje grzybów w hodowlach oraz preparatach mikroskopowych
a) Obejrzeć pod mikroskopem stereoskopowym płytki z przedstawicielami
poszczególnych klas
b) Za pomocą igły mikrobiologicznej sporządzić preparat grzybowy barwiony płynem
Lugola
c) Obejrzeć preparat pod mikroskopem przy małym i średnim powiększeniu.
d) Wykonać rysunek.
Opracowanie wyników
Obserwacje, wyniki i wnioski należy przedstawić w formie sprawozdania