• Analiza DNA i RNA

    • Ocena ilościowa

    • Pomiar absorbancji przy długości fali 260nm i 320nm

      • Stężenia oblicza się według następujących wzorów:

        1. Dwuniciowy DNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 50 x rozcieńczenie

        2. Jednoniciowy DNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 33 x rozcieńczenie

        3. RNA: C (μg/ml) = (A260-A320) x 40 x rozcieńczenie

      1. Elektroforeza w żelu agarozowym razem z wzorcem stężeń DNA/RNA

        1. stężenie żelu: 0,8%

        2. 0,5 μg/μl bromku etydyny

        3. czas: 2h

        4. napięcie: 70V

        5. oglądanie preparatu po rozdziale w świetle o długości fali 312nm (aby nie zniszczyć materiału)

      Ocena jakościowa

      1. Pomiar absorbancji przy długościach fali 260nm, 280nm i 320nm

      Stosunek A(260-320)/A(280-320) świadczy o zanieczyszczeniu preparatu kwasów nukleinowych białkami:

        1. 1,8 - 2,0 - preparat jest wystarczająco oczyszczony

        2. 1,5 - preparat zawiera 50% białka

      1. Elektroforeza w żelu agarozowym

        1. DNA

          • stężenie żelu: 0,8%

          • 0,5 μg/μl bromku etydyny

          • czas: 2h

          • napięcie: 70V

          • oglądanie preparatu po rozdziale w świetle o długości fali 312nm (aby nie zniszczyć materiału)

          • zwarty prążek bez widocznych smug świadczy o dobrej jakości preparatu (wysokocząsteczkowy, niezdegradowany)

          • RNA

            • stężenie żelu: 1,0-1,5%

            • czas: 2h

            • napięcie: 70V

            • wynik rozdziału:

              • dwie dobrze widoczne frakcje 18S i 28S rRNA

              • frakcja mRNA widoczna w postaci smugi

              • czoło - tRNA oraz niskocząsteczkowe RNA

              • Oligonukleotydy

                • żel poliakrylamidowy (10%)

                • HPLC