Data wykonania ćwiczenia:

13.11.2007

Wydział: IS2

Kierunek: Biotechnologia

Ćw. nr: 5

Temat ćwiczenia: Wyznaczanie optymalnego stężenia chlorku 2,3,4-trójfenylotetrazolowego podczas oznaczania aktywności dehydrogenaz za pomocą testu TTC

Wykonały:

Dorota Olszewska

Bania Dominika

Czaja Sabina

I Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia było wyznaczenie optymalnego stężenia TTC podczas badania aktywności dehydrogenaz, na podstawie przeprowadzonego przez nas doświadczenia i obserwacji.

II Przebieg i opracowanie wyników doświadczenia

Szesnaście probówek podzieliłyśmy na pary. Do każdej z probówek dodałyśmy odpowiednie ilości odczynników, według instrukcji. Po dodaniu 8 ml osadu czynnego probówki inkubowałyśmy w ciemnym miejscu. Po wyjęciu probówek z szafki wirowałyśmy je przez 1 min z prędkością 3500 obr./min. Zaobserwowałyśmy zmianę ich zabarwienia na czerwoną. Po wirowaniu supernatant odlałyśmy, a do osadu dodałyśmy 8 ml alkoholu metylowego. Czas inkubacji (od momentu dodania osadu czynnego do chwili dodania metanolu) wyniósł 25 minut. Dokładnie wytrząsnęłyśmy wszystkie probówki, po czym ponownie wirowałyśmy w takich samych warunkach. Dokonałyśmy pomiaru spektrofotometrycznego supernatantu z ostatniego wirowania, wyniki przedstawione są w tabeli poniżej, z uwzględnieniem numerów par probówek:

probówki	ekstynkcja
				średnia ekstynkcja	stężenie TTC w próbce [%]
	1	0,926	0,8265	0,02%
		0,727
	2	1,037			1,106	0,04%
		1,175
	3	1,147			0,938	0,06%
		0,729
	4	1,209			0,9915	0,08%
		0,774
	5	*0,487			0,829	0,1%
		0,829
	6	1,256			1,243	0,14%
		1,23
	7	0,837			0,91	0,16%
		0,983
	8	0,96			1,0255	0,2%
		1,091

*wartość odstająca, pominięta w obliczeniach

Stężenia TTC w próbce obliczyłyśmy z proporcji:

stężenie początkowe TTC wynosiło 2%

Wykres zależności ekstynkcji od stężenia TTC w próbce:

III Wnioski i spostrzeżenia

Na wykresie możemy zauważyć, że wraz ze wzrostem stężenia TTC ekstynkcja początkowo rośnie (do stężenia 0,08), następnie spada. Przy ostatnim stężeniu (0,2) ekstynkcja ponownie rośnie, co jest prawdopodobnie spowodowane błędnym pomiarem.

Na podstawie wyników naszych pomiarów oraz wykresu możemy stwierdzić, że optymalne stężenie TTC wynosi ok. 0,08 - 0,10, ponieważ przy tych dwóch stężeniach możemy zaobserwować największą ekstynkcję. Nie możemy być jednak pewne tego wniosku, ponieważ pozostałe ekstynkcje nie różnią się znacząco od tych najwyższych.

Maksymalna wartość na wykresie (zaznaczona czerwonym punktem) jest równa 10% stężeniu TTC co oznacza, że optymalne stężenie TTC, które będzie stosowane we właściwych oznaczeniach aktywności dehydrogenaz mikroorganizmów wynosi 10%.

---