Katarzyna Cielek

206064

Sprawozdanie z zajęć laboratoryjnych z mikrobiologii

Temat ćwiczenia: Analiza mikrobiologiczna gleby

1.Cel ćwiczenia

Celem ćwiczenia jest nauczyć się oznaczać liczebność bakterii, grzybów, a także jaj robaków pasożytniczych w glebie. Ponadto innym celami jest poznać zakres sanitarnej analizy mikrobiologicznej gleby, poznać zarówno florę, jak i faunę glebową, a także wiedzieć co to jest

mikroflora autochtoniczna i zymogeniczna gleby. Dodatkowym celem jest poznanie jak obliczyć ogólną liczbę bakterii saprofitycznych, przetrwalnikujących oraz termofilnych.

2.Opis

Zad.1 Badanie „ogólnej” liczby bakterii saprofitycznych, przetrwalnikujących oraz termofilnych

Badanie przeprowadzono się metodą płytkową Kocha stosując posiew wgłębny próbek

na podłoże agarowe odżywcze. Badania obejmowały określenie: ogólnej liczby bakterii na podłożu agarowym odżywczym, a także liczby bakterii wytwarzających przetrwalniki (sporowych) - na podłożu agarowym odżywczym

Do posiewu użyto po 1 cm3 zawiesiny z następujących rozcieńczeń:

- gleba piaszczysta - 10-1 -10-3,

- gleba ogrodowa oraz kompost z odpadków miejskich: 10-4 - 10-6.

Po okresie inkubacji policzono ilość wyrosłych kolonii.

Zad.2 Wykrywanie bakterii grupy coli i bakterii coli typu kałowego (Escherichia

coli)

a) Oznaczenia bakterii grupy coli

Wykonano posiew odpowiednich objętości roztworu glebowego do podłoża płynnego Kesslera-Swenartona i inkubacji w temperaturze 37 OC przez 24-48 h. Wykonano posiew tylko dla gleby ogrodowej. Ostateczny wynik badania podano jako miano bakterii grupy coli (miano coli).

b) Oznaczenia bakterii coli typu kałowego (termotolerancyjnych), pałeczki okrężnicy (Escherichia coli)

Wykonano posiew odpowiednich objętości roztworu glebowego do podłoża płynnego Kesslera-Swenartona i inkubacji w temperaturze 37 OC przez 24-48 h. Ostateczny wynik badania podano jako miano bakterii coli typu kałowego (miano E. coli).

Zad.3 Wykrywanie bakterii Clostridium perfringens

Przeprowadzono je stosując posiew wgłębny próbek na podłoże siarczynowo-żelazowe

wg. Wilsona-Blaira w temperaturze 370C przez 18-24±2 h

Zad.4 Oznaczanie bakterii z rodzaju Salmonella

3. Wyniki:

• Badanie „ogólnej” liczby bakterii saprofitycznych, przetrwalnikujących oraz termofilnych

Liczba bakterii w poszczególnych rozcieńczeniach:

Rozcieńczenie	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5	10^-6
Kompost 28^0C	-	-	300	150	50	-
Kompost 80^0C	-	-	10	1	0	-
Gleba ogrodowa 28^0C	-	-	-	22	6	0
Gleba ogrodowa 80^0C	-	-	-	38	160	0
Piasek 28^0C	89	66	30	-	-	-
Piasek 80^0C	0	230	0	-	-	-

Ogólna liczba bakterii:

Rozcieńczenie	10^-1	10^-2	10^-3	10^-4	10^-5	10^-6
Kompost 28^0C	-	-	3000000	15000000	50000000	-
Kompost 80^0C	-	-	100000	100000	0	-
Gleba ogrodowa 28^0C	-	-	-	2200000	6000000	0
Gleba ogrodowa 80^0C	-	-	-	3800000	160000000	0
Piasek 28^0C	8900	66000	300000	-	-	-
Piasek 80^0C	0	230000	0	-	-	-

Kompost 28⁰C- (3 000 000+15 000 000+50 000 000)/3= 22 666 667= 2,3 x 10⁷ jtk/cm³

Gleba ogrodowa 80⁰C- (38 000 00+160 000 000+0)/3= 54600000=5,5 x 10⁷ jtk/cm³

Piasek 28⁰C- (8900+66000+300000)/3=124967=1,2 x 10⁵ jtk/cm³

Piasek 80⁰C- 230000= 2,3 x 10⁵ jtk/cm³

• Wykrywanie bakterii grupy coli i bakterii coli typu kałowego (Escherichia

coli)

a) 222 → ≥2400 NPL w 100 cm³

NPL=2400

Miano coli= 0,04 cm³

b) 220 → 240 NPL w 100 cm³

NPL=24000

Miano coli= 0,00417 cm³

4. Wnioski Najwięcej bakterii na podłożu agarowym odżywczym było w przypadku kompostu, a najmniej w przypadku piasku, ponieważ kompost bardziej sprzyja rozwoju bakterii. Patrząc na wyniki liczby bakterii wytwarzających przetrwalniki - na podłożu agarowym odżywczym można zauważyć, że najwięcej bakterii jest w glebie ogrodowej, a nie w kompoście. Jest to niezgodne z rzeczywistością, gdyż więcej bakterii powinno być w kompoście. W przypadku gleby ogrodowej także nie zgadza się także to, że w 28⁰C znajdujemy mniej bakterii niż w 80⁰C, gdyż powinno być odwrotnie. Wykrywanie bakterii grupy coli i bakterii coli typu kałowego (Escherichia coli) pokazało, że w badanej glebie ogrodowej w przypadku bakterii grupy coli najmniejszą objętością materiału, w którym znajduje się przynajmniej jedna żywa komórka bakterii grupy coli jest 0,04 cm³, natomiast najmniejszą objętością materiału, w którym znajduje się przynajmniej jedna żywa komórka coli typu kałowego jest 0,00417 cm³. W przypadku wykrywania bakterii Clostridium perfringens po inkubacji w głębi agaru wykryto czarne kolonie. Powstały one w wyniku redukcji siarczynu do siarczku sodu, który z chlorkiem żelaza tworzy czarno zabarwiony siarczek żelaza.

W przypadku oznaczania bakterii z rodzaju Salmonella we wszystkich próbach wyniki można uznać za dodatnie, wystąpiły kolonie o zabarwieniu różowym, co oznacza, że ma miejsce obecność kolonii nie rozkładających laktozy. Natomiast na podłożu SS (Salmonella-Shigella) odnotowano obecność gładkich z czarnymi środkami. Na podłożu Kliglera w dolnej części podłoże ma kolor żółty, natomiast powierzchnia skośna ma kolor czerwony. Oznacza to wynik dodatni dla z rodzaju Salmonella.

---