Elektroforeza agarozowa wyizolowanego DNA całkowitego oraz produktów PCR

1. Przygotowanie żelu:

• Przygotować 100 ml 1% żelu agarozowego w buforze 1X TBE. Rozpuścić agarozę we wrzącej łaźni wodnej i gotować jeszcze przez ok. 10 min.

• Ostudzić żel do temp. ok. 60° C i wylać żel do rynienki tak aby ustawiony nad nią grzebień został zanurzony w żelu i spowodował powstanie studzienek.

• Po zastygnięciu żelu (ok. 30 min.) wyjąć grzebień, napełnić aparat buforem 1X stężonym buforem TBE do wysokości 5 mm nad powierzchnię żelu.

2. Przygotowanie próbek DNA:

• Do 5 μl próbki dodać 1 μl buforu obciążającego. Następnie całość nanieść na studzienki żelu.

3. Przygotowanie aparatu i rozdział elektroforetyczny:

• Włączyć zasilanie ze stabilizatora prądu do aparatu do elektroforezy, dla uzyskania optymalnego rozdziału napięcie powinno wynosić ok. 5V/cm odległości pomiędzy elektrodami aparatu do elektroforezy ( w naszym przypadku ok. 120 V).

• Prowadzić elektroforezę aż do momentu, kiedy barwnik osiągnie ¾ długości żelu.

• Wyłączyć zasilanie, wyjąć żel wraz z rynienką i umieścić w wanience zawierającej wodny roztwór bromku etydyny. Barwić żel ok. 10 min. Uwaga!!! Bromek etydyny jest silnym mutagenem- stosować rękawiczki, unikać bezpośredniego kontaktu!!!

• Oglądać prążki na żelu pod lampą UV.