Ochrona Środowiska
MIKROBIOLOGIA
Laboratorium
SPRAWOZDANIE
Z ĆWICZEŃ NR 4,5
STERYLIZACJA I DEZYNFEKCJA.
CEL ĆWICZENIA
Celem ćwiczenia było zbadanie skuteczności środków użytych w celu sterylizacji i dezynfekcji.
CZĘŚĆ PRAKTYCZNA
Zadanie 1. Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji para wodną w autoklawie.
Sporal A, czyli specjalny krążek nasycony zawiesiną zarodników z rodzaju Bacillus. Został on wcześniej przygotowany poprzez wysuszenie w autoklawie i sterylizację przez 20 minut w temperaturze nie mniejszej niż 121°C w autoklawie.
Sporal A zanurzono w bulionie przy użyciu sterylnej pęsety. Inkubowano w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni.
Zadanie 2. Mikrobiologiczna kontrola skuteczności sterylizacji w suchym gorącym powietrzu.
Sporal S, czyli specjalny krążek nasycony zawiesiną zarodników z rodzaju Bacillus. Został on wcześniej przygotowany poprzez suszenie w suszarce i sterylizowany przez co najmniej 2 godziny w temperaturze 160°C.
Sporal S zanurzono w bulionie przy użyciu sterylnej pęsety. Inkubowano w odpowiedniej temperaturze przez 7 dni.
W trzecim bulionie zanurzono sporal K, czyli kontrolny, który nie był wcześniej sterylizowany.
Zadanie 3. Podstawowy sprzęt, który służy to sterylizacji, czyli autoklaw i suszarka.
Autoklaw to dwuścienny kocioł z grubej blachy, szczelnie zamykany ciężką pokrywą. Zaopatrzony jest w manometr, termometr i zawór bezpieczeństwa. Ma on najszersze zastosowanie. Wodę podgrzewa się w nim za pomocą grzejnika elektrycznego. Wytworzona para wodna wypycha powietrze przez otwarty wypust, później urządzenie zamyka się. Para wytwarza w kotle ciśnienie większe od ciśnienia atmosferycznego. Temperatura podnosi się. Para wodna, która zasila autoklaw może przechodzić z zewnętrznego źródła i przed wprowadzeniem do autoklawu wmontowany jest reduktor ciśnienia.
Suszarka umożliwia suszenie, wygrzewanie i sterylizację suchym, gorącym powietrzem. W niej sterylizuje się przedmioty odporne na działanie wysokiej temperatury. Czas pracy suszarki zależy od wybranej temperatury, stopnia wypełnienia suszarki, czasu jej nagrzewania i oziębiania. Wyjaławianie przeprowadza się w temperaturach od 140°C do 180°C.
Zadanie 4. Badanie skuteczności działania wybranych środków dezynfekcyjnych.
Szalkę Petriego podzielono na pięć sektorów. Podział zrobiono pisakiem na szklanym denku szalki. Na każdym z sektorów należało odcisnąć palec. Odciskany był każdy inny palec. Podczas odciskania kolejno palców szalka była uchylana i szybko zamykana. Sektory przedstawiały się następująco:
| Sektor | Środek dezynfekcyjny | Ilość kolonii w sektorze |
|---|---|---|
| K | kontrola – polec nie zdezynfekowany | 25 |
| OH | palec zdezynfekowany alkoholem | 0 |
| H2O2 | palec zdezynfekowany woda utlenioną | 7 |
| NaCl | palec przetarty roztworem soli fizjologicznej | 58 |
| M | palec umyty mydłem | 79 |
Dezynfekowano sterylną watą pobierana sterylną pęsetą.
Szalkę należało inkubować przez tydzień w temperaturze pokojowej.
Opis kolonii po dezynfekcji H2O2 :
-kształt – okrągły
-lekko wypukłe-wyniosłość ponad powierzchnie
-wielkość, średnica kolonii – 2 mm
-brzeg równy
-kolor – biały
-przejrzystość - nieprzejrzysta
-powierzchnia – gładka
Zadanie 5. Oznaczanie współczynnika fenolowego.
Wykonano rozcieńczenie fenolu i rozlano po 4 ml do pięciu sterylnych probówek. Równolegle ustawiono pięć probówek z podłożem bulionowym. Następnie do pierwszej probówki z fenolem dodano 4ml 1%-owego ACE. Z powstałego roztworu pobrano 2ml i przeniesiono do kolejnej probówki z fenolem. Rozcieńczenia dokonano dla wszystkich próbek. Następnie probówki zaszczepiane były E-coli o objętości 0,5 ml. Wymieszano na wytrząsarce. Inkubowano przez 15 minut. Materiał z zaszczepionych rozcieńczeń przeniesiony został ezą do probówek z bulionem odżywczym. Podłoża bulionowe inkubowano były przez 48 godzin w temperaturze 37ºC.
Wyniki:
| Środek dezynfekcyjny | Rozcieńczenie |
|---|---|
| 1x | |
| 1% Domestos | - |
| 1% ACE | - |
| 10% Septanol | - |
| 2% fenol | - |
Gdzie:
+ zmętnienie
- brak zmętnienia
$$WF = \frac{Najwieksze\ rozcienczenie\ badanego\ zwiazku\ zabijajace\ bakterie}{Najwieksze\ rozcienczenie\ fenolu\ zabijajace\ bakterie}$$
WFD = 1
WFA = 1
WFS = 16
Zadanie 6. Badanie skuteczności działania promieniowania ultrafioletowego na drobnoustroje obecne w powietrzu.
a) Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu przed włączeniem lampy UV:
2 odkryte szalki Petriego z agarem odżywczym i 2 z podłożem Sabourauda położono w pobliżu wyłączonej lampy UV na 10 minut. Po 10 minutach nakryto powrotem szalki i poddano tygodniowej inkubacji w temperaturze pokojowej.
b) Badanie obecności bakterii i grzybów w powietrzu po włączeniu lampy UV:
Włączono lampę UV na 30 minut. Po wyłączeniu lampy UV pozostawiono w jej pobliżu szalki Petriego z agarem odżywczym i podłożem Sabourauda na 10 minut. Następnie zamknięto szalki i inkubowano przez tydzień w temperaturze pokojowej.
Wyniki:
| Przed UV | Po UV | |
|---|---|---|
| Saburon | 10 | 0 |
| Agar | 15 | 0 |
Wnioski:
Zadanie 1 i 2: Sterylizacja była skuteczna. Sporal kontrolny rozwarstwił się. Natomiast sporal A i S nie. Świadczy to o zachowaniu odpowiedniej sterylności i jałowości przy przenoszeniu sporali do odpowiednich probówek.
Zadanie 4: W sektorze NaCl wytworzyło się najwięcej kolonii bakterii. Świadczy to o tym, że NaCl nie jest dość dobrym środkiem dezynfekcyjnym. W przypadku alkoholu nie zaobserwowano żadnych kolonii, co świadczy o tym, że jest to najskuteczniejszy środek dezynfekcyjny.
Zadanie 5: Pozwoliło określić, największe rozcieńczenie środków dezynfekcyjnych, przy którym zabija bakterie . To doświadczenie pokazało, że jedynie Septanol ma największe zdolności bakteriobójcze po rozcieńczeniu. Po porównaniu wyników współczynnika fenolowego można zauważyć, że żadna z badanych substancji nie jest silniejsza od fenolu.
Zadanie 6: Polegało na sprawdzeniu, jak skutecznie promieniowanie UV działa na usuwanie bakterii w powietrzu. Jedynie na jednej szalce, z agarem, wytworzyły się kolonie – 3 przed zadziałaniem promieniowania i 1 po UV. Może to świadczyć o niewielkim zanieczyszczeniu powietrza, ponieważ w pomieszczeniu, w którym było przeprowadzane doświadczenie, były one przeprowadzane również wcześniej. Miało to wpływ na uzyskane rezultaty
Wyszukiwarka