Ćwiczenie

Izolacja bakterii z brodawek korzeniowych

Korzenie koniczyny i lucerny jałowi się w następujący sposób:

1) 3 x 3 min. w jałowej wodzie

2) 1 min. w 0,1 % r-r HgCl₂

3) 3 x 3 min. w jałowej wodzie

4) 1 min. w 75% alkoholu

5) 5 x 5 min. w jałowej wodzie

Następnie jałową brodawkę nakłuwa się tzw. ezą kłutą lub rozgniata jałową szpatułką, na jałowej płytce, a zawartość wysiewa na pełne podłoże dla Rhizobium (79CA) z dodatkiem streptomycyny, ryfampicyny i obu antybiotyków, natomiast dla P.trifolii na podłoże TY. Dodatkowo wysiewamy bakterie brodawkowe w podłoże płynne 79CA dla Rhizobium i podłoże TY dla Phyllobacterium.

Pożywka pełna dla Rhizobium 79CA (pH 7,2-7,4):

Mannitol 10,0 g

K₂HPO₄ 0,5 g

MgSO₄ x 7H₂O 0,2 g

NaCl 0,1 g

CaCO₃ Å›lady

wyciąg drożdżowy 1,0 g

agar 15 g

woda do 1000 ml

Pożywka pełna dla Phyllobacterium TY (pH 7,2):

Bacto trypton 5,0 g

CaCl₂ x 6H₂O 1,3 g

wyciąg drożdżowy 3,0 g

agar 15 g

woda do 1000 ml