Schemat ogólny

10 g produktu + 90 ml soli fizjologicznej

Homogenizacja (Stomacher 400)

Seria dziesiętnych rozcieńczeń

Drobnoustroje tlenowe	Agar odżywczy	30ºC, 72h 25ºC, 48h	Wszystkie kolonie
Enterobacteriaceae	VRBG (zieleń, róż, żółć i glukoza) BLBVB (zieleń, laktoza, żółć i sole żółciowe)	30ºC, 24-48h	Różne
E. coli	Fluorocult + MUG	25ºC, 24-48h	Fluorescencja i wytwarzanie indolu
Enterococcus	m-enterococcus podłoże Roth'a	37ºC, 48h	Czerowne i różowe kolonie, katalazo ujemne /konieczne potwierdzenie/
Micrococcus Staphylococcus	Agar Chapmana KRANEP	37ºC, 48h	Ziarniaki katalazo dodatnie, test na koagulazę
Clostridium	DRCM Agar, podłoże Wrzoska	37ºC, 72h, anaerobowo	Czarne kolonie
Drożdże i pleśnie	Agar ziemniaczany z antybiotykiem	25ºC, 72h- 5dni	Drożdże i pleśnie

UWAGA ! NA EGZAMIN NAUCZYĆ SIĘ CO NAJMNIEJ JEDNEGO OZNACZANIA DROBNOUSTROJU.

NOWE PODLOŻA

E.coli

- 4 - metylo - bellifenylo - β - D - glukoromid

MUG ⇒ metylobelliferen jest fluoryzujący

Enzym

Enzym - β - D - glukoromidaza

- zestaw QUINTET 3M - Enterobacteriacea

Automatyczne testy - czytnik przez zmętnienie (nie ma różnych kolorów)

Test API 20E

Triady reakcji wykorzystywana w systemie API 20E

Od 0 do 7 - każda liczba określa dany wynik

Nowe podłoża

E. coli:

- MUG →metylobelliferon jest fluoryzujący

Enzym B-D - glukuronidaza

- test IMVIC - produkcja indolu, ruchliwość, wykorzystanie cytrynianu (dodatnie dla E. coli)

- test Mc Kenzy'ego - podłoże Shuberta, inkubacja 44ºC

Salmonella - kolonie różowe na testach: glukuronazy, β-galaktozydazy

Różne podłoża dla drobnoustrojów:

Drobnoustroje	Podłoże
Salmonella Proteus Coliformy	Rambach agar
Salmonella	Diasalm
Escherichia coli	BBL chromagar 0157
Do badania wody na wykrywanie enterokoków	Readycult

-do oznaczania Salmonella:

-podloże Rambach

-DIASALM - półpłynne do szybkiego wykrywania Salmonella, któa rozprzestrzenia sie na plytce w postaci czerwoego okregu o brązowym srodku

-Salmosyt - w tabelkach

-pozywka Rappaport - Vassiliadis

-Podloże Hektoena - do izolowania Enterobacteriae, a także do wykrywania Salmonella i Shigella

Salmonella

Gatunek - Salmonella enterica, Salmonella bongori

Podgatunek - subsp

S. enterica subsp enterica

S. enterica subsp salamae

S. enterica subsp arizona

S. enterica subsp houtenoe

S. bongori subsp V (maja swoje numery a nie nazwy)

Serotyp- serowar = ser.

S. enterica subsp enterica ser. Typhimurium - Salmonella Typhimurium

S. enterica subsp. enterica ser. Identidis - Salmonella Identidis

Schemat badań na obecność pałeczek Salmonella wykonywany metodą standardową i z zastosowaniem nowych podłoży i testów

Matoda posiewów do oznaczeń obecności i liczebności Listeria monocytogenes w żywności i paszach - schemat procedury zgodnej z normą ISO/EN/DIN 11290-1:1996

Staphylococcus ureus - badanie produktu

Izolacje DNA - wyekstrahowanie DNA

1. denaturacja nici DNA

2. przyłączenie primerów

3. ponowna denaturacja 4 nici

Identyfikowano 7 gatunków bakterii poprzez analizę wielkości produktu od 109 do 727pz (par zasad)

(F - primer wiodący R - primer odwrotny)

RAPD - do identyfikacji drożdży

Wykaz łańcuchowej reakcji polimery do wykrywania genów. W metodzie wykorzystuje się jeden starter który pełni funkcję wiodącego i odwrotnego. Primery muszą być odpowiednio wybrane dla każdego drobnoustroju. W zalezności ile jest prążków to można odczytać na ścieżkach.

Różnicowanie drożdży przy pomocy RFLP-CPR-rRNA - analiza długości fragmentów restrykcyjnych otrzymanych po CPR dla fragmentu rRNA.

Chodzi o budowę genu rRNA - zawiera on 3 regiony konserwatywne i 4 niekonserwatywne.

Region 5,8S dla S. bayanus, S. ceserisiae, S. paradoxus, S. pastorianus ma obszar wielkości 850pz

Fragmenty genów są pocięte na obszary w których działają enzymy: Hae III, Hap II, Scr F, Hind III

Analiza restrykcyjna fragmentów DNA umożliwia identyfikację gatunku. Pozwala stwierdzić czy mamy do czynienia z czystymi gatunkami czy mieszańcami (hybrydami). Analiza ta może być wykonana na dowolnym genie, nie musi być to rRNA.

Kilkustarterowa (Multipleks) CPR jako metoda identyfikacji grzybów i patogenów.

Inne zastosowanie analizy typu CPR na wykrywanie obecności genów.

Pozwala na identyfikację produktów spożywczych, składników żywnościowych, czy nie są zafałszowane czymś.

4-5dni

25g woda peptonowa zbuforowana 225ml

Pożywka

Rapaport-Vassiliadis

Hektoen Enterie agar S-S

Próbkowe testy biochemiczne 24h

18-20h

24-48h

24h

25g Salmosyst I 225ml

Salmosyst I

Rabmach Agar

Test Api Rapia 20E

Test lateksowy Welteolex

2,5dnia

6-8h

godzina

Kilka min

24h

20h

25g (szukamy patogenów)

Agar Baird-Parkera

Agar Champana

Podłoże Giolitti-Cantoni 225ml

Podłoże Giolitti-Cantoni 90ml

10g (rutynowe badanie produktu mięsnego

Kolonie mannitol+ i katalazo+

Test lateksowy

Bulion mózgowo-sercowy

24h

Kilka min (przygotowanie)

Inkubacja do 8h

Wynik końcowy

Wynik po 1 min

Plazma królicza po 1h

42h

66h

---