Zastosowanie FISH
(Fluorescencyjna Hybrydyzacja in situ):
precyzyjna lokalizacja punktów złamań w chromosomach
badanie fuzji genowych (np. białaczki)
określanie pochodzenia chromosomów markerowych
badanie mikrodelecji
określanie pochodzenia centromerów
badanie obecności telomerów
badanie amplifikacji genów
mozaicyzm
kariotypowanie
…
Sonda: dwuniciowy odcinek DNA lub cDNA, komplementarny do badanego obszaru, wyznakowany pośrednio lub bezpośrednio
Schemat postępowania przy Bad. FISH
Przemycie preparatu 2xSSC (2 min);
szereg alkoholowy: 70%, 90%, 100% EtOH (po 2 min);
nałożenie sondy;
denaturacja (np. 73*C, 2 min);
hybrydyzacja 37*C, noc;
odpłukanie tła (np. 73*C, 0,4xSSC, 2 min)
nałożenie DAPI
analiza obrazu
FISH - SONDY:
malujące - metafazy
translokacje, aneuploidia, chromosomy
markerowe
centromerowe - jądra interfazalne, metafazy
dicentryki, aneuploidia: Zespół Downa,
Edwardsa, Patau, Turnera, Klinefeltera.
specyficzne - jądra interfazalne, metafazy
telomery, specyficzne translokacje (BCR/abl)
mikrodelecje (np.Zespół Williamsa, PWS)
nuc ish 21q22(D21S23x3)[100]
ish t(2;14)(wcp2+;wcp2+)
ish 4p16.3(D4S3327-D4S166x2),4qter(dj963k6x2)
ish 18cen(D18Z1x2)[100]
ish der(4)t(4;22)(WHSCR-,dj96k6+,D22S1726+;D22S1726+)
ish 22q11.2(TUPLE1x2),22qter(N85A3x2)[100]
ish Xcen(DXZ1x1),Ycen(DYZ3x1)[56]
nuc ish Xcen(DXZ1x1),Ycen(DYZ3-)[15]/Xcen(DXZ1x2),Ycen(DYZ3-)[400]
ish t(4;20)(wcp4+;wcp4+)
ish t(2;D)(wcp2+;wcp2+)
nuc ish 9q34(ABLx2),22q11.2(BCRx2)(ABLconBCRx1)[80]
Rodzaje sond
Sonda
telomerowa
Sonda
specyficzna
Sonda
centromerowa
Sonda malująca