5- peroksydazy, mikrobiologia przemysłowa, laboratorium


Ćwiczenie 5

Wykazanie aktywności peroksydazowej w materiale biologicznym.

Materiały:

Biokatalizatory: korzeń pietruszki, liście fasoli, ziemniak, igły sosny, bufor octanowy 0,05M (pH 5,6), 0,02 M roztwór pirogalolu, 0,06 roztwór H2O2

Wykonanie:

  1. 1 g materiału roślinnego zhomogenizować w moździerzu z 1-3 ml buforu octanowego i uzupełnić buforem do 10ml. Przenieść do sterylnej kolbki okrąglodennej.

  2. Kolby wytrząsać przez 10 min, następnie odwirować 5ml zawiesiny.

  3. Zlać supernatant do probówki (zostawić). Osad w probówce wirówkowej zalać ponownie 5 ml buforu, rozmieszać i odwirować.

  4. Połączyć supernatanty.

  5. Przygotować próby:

a. do szklanej probówki wprowadzić 0,9ml buforu octanowego, 0,5 ml r-ru pirogalolu, 500μl ekstraktu enzymatycznego, 0,5 ml H2O2.

b. do szklanej probówki wprowadzić 0,9ml buforu octanowego, 0,5 ml r-ru pirogalolu, 500μl ekstraktu enzymatycznego, 0,5 ml H2Odest

c. do szklanej probówki wprowadzić 0,9ml buforu octanowego, 0,5 ml r-ru pirogalolu, 500μl H2Odest , 0,5 ml H2O2

  1. Wymieszać i próby inkubować przez 4 min w temp. 300C

  2. Dokładnie po 4 min zmierzyć absorbancję roztworów przy λ=430nm.

  3. Miarą aktywności enzymu (peroksydazy) jest różnica absorbancji próby a i b

0x01 graphic

Utlenienie pirogalolu w obecności peroksydaz

C=A/a*b (C- stężenie produktu mM, A- absorbancja, a- grubość kuwety, b=2.47 1/Mm*cm - milimolowy współczynnik absorpcji)

Mikrobiologia przemysłowa



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Lab 6- peroksydazy, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
Lab 2 Dezintegracja mechaniczna, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
Lab 3 Dezintegracja niemechaniczna, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
6- woda, mikrobiologia przemysłowa, laboratorium
Lab 5 - enzymy, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
4-enzymy - poprawiony z podlozem lipolitycznym, Biotechnologia PWR, Semestr 5, Mikrobiologia Przemys
5- peroksydazy, Mikrobiologia przemysłowa
dezintegracja, mikrobiologia przemysłowa, laboratorium
Lab 10 Immobilizacja, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
Lab 12 Antybiotyki, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje
mikrobiologia zagadnienia, mikrobiologia przemysłowa, laboratorium
Lab 4 - woda, PWr, Mikrobiologia przemysłowa laboratorium, Instrukcje

więcej podobnych podstron