Konspekt

Małgorzata Nemeczek, Natalia Łowkis, ćw 6, gr 1/5

Temat: Oznaczanie stężenia glukozy metodą redukcyjną

Cel: Oznaczenie stężenia glukozy w badanych próbach.

Metoda pośredniego oznaczania stężenia glukozy w próbie polega na kolorymetrycznym oznaczaniu stężenia barwnego związku powstającego z kwasu pikrynowego w wyniku redukcji glukozą.

Glukoza redukuje kwas pikrynowy do kwasu pikraminowego. W środowisku alkalicznym, w temperaturze wrzenia wody pikramian sodu przybiera czerwone zabarwienie. Natężenie barwy jest wprost proporcjonalne do stężenia glukozy w próbie.

Odczynniki i materiał:

- bufor octanowy 0,01mol/l, pH 4,7

-10% NaOH roztwór wodny

- 1,2% roztwór kw. pikrynowego

- wzorzec glukozy 5,56 mmol/l w buforze octanowym

Dane: wzorzec glukozy 5.56 mmol/l

Przygotowałyśmy 9 podpisanych probówek. Do 6 z nich odmierzyłyśmy podane w tabeli objętości odczynników do kalibracji metody.

Rodzaj próby Nr próbki	zerowa	wzorcowa
		P1	P2	P3	P4	P5	P6
Wzorzec glukozy [μl]	0	10	20	30	40	50
Bufor octanowy 0,01mol/l [μl]	50	40	30	20	10	0

Do trzech pozostałych probówek dodałyśmy po 50μ roztworu glukozy o nieznanym stężeniu. Następnie do wszystkich 9 probówek dodałyśmy 100μl 10%NaOH i 100μl nasyconego roztworu kwasu pikrynowego. Zawartość probówek dokładnie wymieszałyśmy i zakorkowałyśmy, potem ogrzewałyśmy we wrzącej łaźni wodnej w temperaturze 100^oC przez 8 min. Po oziębieniu probówek dodałyśmy po 1ml wody destylowanej, dokładnie wymieszałyśmy. Następnie zmierzyłyśmy absorbancję każdej próbki.

Próba	0	1	2	3	4	5	6	7	8
Absorbancja	0,127	0,298	0,477	0,610	0,666	0,798	2,881	2,833	2,891

Na wykresie 9 prób oznaczone jest następująco: 0,1,2,3,4,5,6,7,8 ,gdzie 6,7 i 8 to glukoza o nieznanym stężeniu, a 0 to próba zerowa.

Cukier 1:

A= 2,881

y=0,3943x-0,2904

0,3943x=2,881-0,2904

0,3943x=2,5906

x=6,57mg/ml

Cukier 2:

A= 2,833

y=0,3943x-0,2904

x=6,45 mg/ml

Cukier 3:

A= 2,891

y=0,3943x-0,2904

x=6,60 mg/ml

Cwzorca=f(A) wzorzec glukozy 5.56 mmol/l

5,56mmol/l=0,00556mol/l

Średnie stężenie glukozy wyniosło: 6,54 mg/ml

Odchylenie standardowe wyniosło: 0,064807

Stężenia pozostałych próbek obliczone ze wzoru y=0,3943x-0,2904

0. y=0,127
   x=1,059mg/ml

1. y=0,298
   x=1,492mg/ml

2. y=0,477
   x=1,946mg/ml

3. y=0,610
   x=2,284mg/ml

4. y=0,666
   x=2,426mg/ml

5. y=0,798
   x=2,760mg/ml

Wnioski:

Pomiar absorbancji pozwolił nam uzyskać dane potrzebne do wykresu, a otrzymane wyniki pomogły nam w obliczeniu stężeń glukozy.

---