OZNACZANIE OGÓLNEJ LICZBY MIKROORGANIZMÓW
/wg. PN-EN ISO 6222/
1/ w 36±20C po 48 h /mezofilnych/
2/ w 22±20C po72 h /psychrofilnych/
Jest to metoda hodowlana, w której zakłada się, że każda kolonia rozwija się z pojedynczej komórki bakteryjnej, pozwala więc na określenie liczby żywych, zdolnych do rozmnażania komórek bakterii znajdujących się w badanym materiale. Oznaczenie wykonuje się metodą płytkową Kocha, stosując posiew głębinowy na podłoże z agarem odżywczym.
Materiał: woda badana (wodociągowa, butelkowana, powierzchniowa: np. rzeczna)
Odczynniki i aparatura:
• podłoże - agar odżywczy:
Bacto Trypton „Disco” 10g
ekstrakt drożdżowy 5g
NaCl 10g
agar 13g
uzupełnić H2O dejonizowaną do 1000 ml
• jałowe płytki Petriego
• probówki z płynem do rozcieńczeń (woda dejonizowana) poj. 10 ml
• jałowe pipety mikrobiologiczne (poj.1ml)
Wykonanie:
1. Wykonać posiew bakterii na agar odżywczy w dwóch równoległych powtórzeniach.
Wodę wodociągową należy posiewać bezpośrednio, pobierając 1 ml wody i przenosząc na jałową płytkę Petriego. Dodatkowo posiewu dokonuje się z rozcieńczenia 10-1 (10x).
Wodę powierzchniową posiewa się z rozcieńczeń 10-3 i/lub 10-5 .
2. Płytki z zawiesiną bakterii (1ml) zalać upłynnionym na łaźni wodnej i ostudzonym do 45°C podłożem agarowym i po dokładnym wymieszaniu pozostawić do zastygnięcia.
3. Płytki odwrócić do góry dnem i jedną z nich wstawić do cieplarki o temperaturze 22°C (oznaczenie bakterii psychrofilnych), drugą do cieplarki o temperaturze 37°C (oznaczenie bakterii mezofilnych).
4. Po okresie inkubacji (72 h dla bakterii psychrofilnych i 48 h dla bakterii mezofilnych) policzyć wyrosłe kolonie. W razie stosowania rozcieńczeń próbki, liczbę koloni należy pomnożyć przez odwrotność rozcieńczenia.
5. Wynik oznaczenia umieścić w protokóle jako liczbę bakterii psychrofilnych oraz liczbę bakterii mezofilnych w 1 ml wody i porównać z normami.