Obliczenia
Elektroforeza w żelu agarozowym w celu oceny analizowanych próbek DNA.
Przygotowano 100 ml 0,8% żelu agarozowego w buforze 1xTAE według następujących obliczeń.
Objętość buforu:
1/50*100 ml= 2ml TAE
Masa agarozy:
0,8 g - 100 ml
x g - 100 ml
x = 0,8 g
Objętość buforu potrzebnego do prowadzenia elektroforezy:
1/50*2000 ml= 40ml TAE uzupełniono wodą destylowaną do objętości 2L
Nieizotopowa detekcja DNA
W celu zablokowania niespecyficznych miejsc wiązania przygotowano bufor J.
Roztwór wyjściowy był 20x stężony.
1/20 * 100mL = 5mL buforu J - uzupełniono wodą destylowaną do 100mL
A następnie bufor K
Roztwór wyjściowy był 20x stężony.
1/20 * 50mL = 2,5mL buforu J - uzupełniono wodą destylowaną do 50mL
Detekcja
W celu detekcji produktów hybrydyzacji przygotowano bufor J.
Roztwór wyjściowy był 20x stężony.
1/20 * 10mL = 0,5mL buforu J - uzupełniono wodą destylowaną do 10mL
A następnie bufor SAAP(P)
Roztwór wyjściowy był 20x stężony.
1/20 * 8μL = 0,4μL buforu P - uzupełniono wodą destylowaną do 8μL
Po czym ponownie przygotowywano bufor J
1/20* 200mL = 10ml - uzupełniono wodą do objętości 200mL