ćw1-metody izolacji Ig-wysalanie, immunologia, ćwiczenia


METODY IZOLACJI IMMUNOGLOBULIN

!!! Wszystkie prace z surowica proszę BEZWZGLĘDNIE przeprowadzić w rękawiczkach !!!

Odczynniki, materiał biologiczny:

Opis metody:

1. Surowicę /0,5-1 ml/ rozcieńczyć 2-3 krotnie roztworem PBS lub 0,9 % roztworem NaCl

- aby zwiększyć odległości między cząsteczkami i stworzyć optymalne warunki do wysalania

2. Zważyć masę surowicy i obliczyć ile należy dodać siarczanu amonu, aby otrzymać pożądane stężenie

wzór: Cp %= x/ ms + x x- masa substancji, która należy dodać

ms- znana masa substancji (tu surowicy)

ms+x= mr (masa roztworu)

3. Do tak przygotowanego roztworu dodawać delikatnie mieszając sproszkowany siarczan amonu, doprowadzając do:

4. otrzymane roztwory odstawić na 10 minut w temp. 4 stopni C /chłodziarka/

5. Powstałe osady odwirować przy 4000 RMP przez 20 minut, zalać supernatant (IgG)

6. Przemyć osad nasyconym roztworem siarczanu amonowego i odwirować (4000 RMP 15 min.) dwukrotnie

7. Otrzymany „mokry” osad immunoglobulin dializować lub zamrozić, zliofilizować i przechowywać w temp. - 20 stopni C/ może być wykorzystany do następnych ćwiczeń



Wyszukiwarka