MIKROBIOLOGIA PRZEMYSŁOWA W OCHRONIE ŚRODOWISKA
Ćwiczenie 1
Temat:
Pozyskiwanie mikroorganizmów zdolnych do biodegradacji związków ksenobiotycznych - selekcja mikroorganizmów zdolnych do rozkładu katecholu oraz fenolu (cz. 1)
Zagadnienia teoretyczne:
przypomnienie wiadomości z mikrobiologii ogólnej: typy podłoży bakteriologicznych i techniki posiewów
pozyskiwanie mikroorganizmów do celów przemysłowych: zasady racjonalnego skriningu, sposoby zwiększania liczebności poszukiwanych mikroorganizmów,
metody selekcji szczepów
definicja ksenobiotyku
Część praktyczna:
Materiały:
próba środowiskowa - woda pobrana z Kłodnicy oraz Rawy
sterylna sól fizjologiczna
płytki z zestaloną (agarem) pożywką Kojima ze zmniejszoną do 0,01 g/l ilością ekstraktu drożdżowego
0,25 M r-r fenolu
0,5 M r-r katecholu
pipety automatyczne, sterylne końcówki
głaszczka
denaturat
Procedura:
w warunkach sterylnych przygotować podłoża selekcjonujące poprzez dodanie takiej objętości 0,25 M roztworu fenolu lub 0,5 M roztworu katecholu, aby stężenie tych związków w podłożu wyniosło 1 mM (objętość pożywki wylanej na płytkę wynosi 10 ml).
wysterylizowaną głaszczką delikatnie i dokładnie rozprowadzić przeniesioną objętość roztworów
i odczekać 20 minut.
w przerwie wykonać szereg rozcieńczeń próby środowiskowej 10-1 oraz 10-2.
po upływie wyznaczonego czasu z rozcieńczenia 10-1 i 10-2 wysiać murawowo 0,1 ml.
płytki inkubować w temperaturze 25oC przez 48-72 godzin.
W przypadku słabego wzrostu po upływie wymaganego czasu inkubacji okres hodowli można wydłużyć o kolejne 48 godzin. W przypadku uzyskania intensywnego wzrostu, w celu uniknięcia przerastania płytek i zestarzenia się hodowli, płytki należy przechować do kolejnych zajęć w lodówce.
LITERATURA ŹRÓDŁOWA:
CHMIEL A.: „Biotechnologia - podstawy mikrobiologiczne i biochemiczne” - Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa, 1998
RÓŻALSKI A.: „Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej” - Wydawnictwo Uniwersytetu Łódzkiego, Łódź, 1996
SCHLEGEL G. H.: „Mikrobiologia ogólna” - Wydawnictwo Naukowe PWN, Warszawa 2003
Źródła internetowe