Zestaw 89.
1.Karbamoilofosforan-udział w metabolizmie.
2.Metaboizm chylomikronów.
3.Typy chromatografii stosowanych w pracowniach biochemicznych.

1.Karbamoilofosforan
=> biosynteza mocznika (Harper 397-398)
Karbamoilofosforan powstaje w pierwszej reakcji cyklu mocznikowego.Reakcja ta zachodzi (wraz z następną w matriks mitochondrialnym, pozostałe zachodzą w cytosolu hepatocytów).
CO2 + NH4+ +(2Mg-ATP)=>(2Mg-ADP+Pi) + karbamoilofosforan
Reakcja katalizowana jest przez syntetazę karbamoilofosforanową I (której aktywatorem allosterycznym jest N-acetyloglutaminian).
Reakcja powstawania karbamoilofosforanu jest procesem złożonym (3 etapy wg Stryer'a):
1) HOCOO(-) (wodorowęglan) + ATP => ADP + HOCOPO3(2-) (karboksyfosforan)
2) HOCOOPO3(2-) + NH2 => Pi + HOCONH2 (kwas karbaminowy)
3)HOCONH2 + ATP => ADP + (2-)O3POCONH2 (karbamoilofosforan)
W następnej reakcji cyklu mocznikowego następuje przeniesienie reszty karbamoilowej karbamoilofosforanu na ornitynę, w wyniku czego powstaje cytrulina (przechodząca do cytosolu i ulegająca dalszym przekształceniom).
Ornityna + karbamoilofosforan => Pi + cytrulina
Reakcję katalizuje karbamoilotransferaza ornitynowa

=>biosynteza pirymidyn (Harper 481-482)
Biosynteza pirymidyn rozpoczyna się od syntezy karbamoilofosforanu z glutaminy (dawca azotu), ATP i CO2. Reakcja ta jest katalizowana przez cytoplazmatyczną syntetazę II karbamoilofosforanową.
CO2 + glutamina + ATP => karbamoilofosforan
W następnej reakcji katalizowanej przez karbamoilotransferazę asparaginianową karbamoilofosforan kondensuje z asparaginianem tworząc karabamoiloasparaginian.
Karbamoilofosforan + Asp => Pi + karbamoiloasparaginian
(z karbamoilofosforanu pochodzi C2 i N3 pierścienia pirymidyn).







2. www.fmat.prv.pl (był tam kiedyś wykład z lipidów)











3. Harper 50,22,49,60,214,60,105
Metody chromatograficzne stosowane do rozdziału i oczyszczania biomolekuł:
chromatografia bibułowa, jonowymienna (anionity,kationity), powinowactwa, cienkowarstwowa, ciecz-gaz, cieczowa wysokosprawna.
Rozdział aminokwasów (aa):
1)bibułowa-roztwór aa nanosi się na pasek bibuły, potem rozwinięcie chromatografu, wysuszenie i wybarwienie roztworem ninhydryny w acetonie, Rf
=>aa z długimi niepolarnymi R wędrują dalej od tych z krótszymi niepolarnymi, czy z polarnymi grupami
2)TLC (PTLC-podziałowa i ATLC-adsorpcyjna)
PTLC=>rozdział na podstawieodmiennej rozpuszczalności składników w fazach stacjonarnej i ruchomej
=>typowy układ faz (faza stacjonarna jest bardziej polarna) => ruchliwość aa jak w bibułowej
=>odwrócony układ faz (ruchoma bardziej polarna) => polarne aa szybciej od niepolarnych
ATLC=>adsorpcja składników na prażonym żelu krzemionkowym, eluowane przez fazę ruchomą
3)HPLC=>nawet pikomolowe ilości
Rozdział peptydów,białek:
1)jonowymienna-na podstawie ładunku
=>faza stała=adsorbent(żywica),np.karboksymetylozeluloza (kationie, wiąże białka o =>dodatnim ładunku), dietyloaminoetyloceluloza (anionit)
=>faza ruchoma-roztwór białek
=>elucja roztworem NaCl o wzrastającym stężeniu (konkurencja Na+ lub Cl-)
2)powinowactwa-wybiórcza,bardzo wysoki stopień oczyszczenia
=>koenzym lub substrat związane ze stałym, niereagującym z białkiem nośnikiem wiążą białko enzymatyczne
=>elucja poprzez dysocjację utworzonego kompleksu
3)HPLC-wyższy stopień rozdziału,szybciej
=>wymuszony, szybki przepływ roztworów przez kolumnę z żywicą pod zwiększonym ciśnieniem
Oczyszczanie enzymów:
1)chromatografia jonowymienna
2)powinowactwa
Rozdział lipidów:
1)TLC-do rozdziału lipidów
2)chromatografia gazowo-cieczowa(GLC) - do rozdziału poszczególnych kwasów tłuszczowych

---