III
1. 1) metody hodowli bakterii beztlenowych
Bakterie dla których tlen jest toksyczny nazywamy bezwzględnymi beztlenowcami. Metoda hodowli:
-zastosowanie anaerostatów(wypompowywanie tlenu- można wtłoczyć inny gaz)
-podłoże Wrzoska- bulion z kawałkami wątroby, powierzchnia pokryta parafiną) Wycinki wątroby obniżają potencjał oksydoredukcyjny bulionu, zaś parafina uniemożliwia dostęp powietrza do pożywki po sterylizacji.
-chemiczne pozbywanie się tlenu(polegają na umieszczeniu w hermetycznie zamkniętym naczyniu substancji chemicznych,)
-metoda biologiczna- płytka Fortnera(pół na pół tlenowe/beztlenowe posiewamy - szczelne zaklejenie płytek
2. 2) opisz sposoby wykorzystywania związków zawierających azot w różnicowaniu biochemicznym
Zdolność wytwarzania siarkowodoru (rozkład aminokwasów zawierających siarkę) bada się na specjalnych podłożach, np. Kliglera, SS itp. Pod wpływem powstającego siarkowodoru następuje czernienie podłoża.
Zdolność produkowania indolu bada się na podłożu z wodą peptonową i tryptofanem. Po odpowiednim czasie inkubacji dodaje się do podłoża kilka kropli odczynnika Kovacsa i miesza przez wstrząśnięcie probówki. Obecność indolu widoczna jest w górnej warstwie w kształcie wiśniowego pierścienia. Jeśli badane drobnoustroje nie wytwarzają tego produktu, pierścień nie pojawia się.
Zdolność rozkładu mocznika przez badane drobnoustroje wykrywa się na podłożu Christensena z mocznikiem. Jałowe podłoże ma kolor żółty. Jeżeli po posiewie i inkubacji zmieni się jego barwa na czerwonofioletową, świadczy to o wytwarzaniu przez posiane bakterie ureazy. Rozkładowi mocznika przez ten enzym towarzyszy produkcja amoniaku, który alkalizując podłoże zmienia jego zabarwienie.
Zdolność dekarboksylacji lizyny i związaną z tym alkalizację można stwierdzić, posiewając badane drobnoustroje na podłoże Falkowa. Dodatni wynik to zmiana zabarwienia podłoża na kolor fioletowy, dzięki purpurze bromokrezolowej. Przy ujemnej reakcji ma ono barwę żółtą.
3. 3) opisz (wymień?) etapy toku postępowania biochemicznego, istota identyfikacji serologicznej :
1. Badanie mikroskopowe
2. Badanie hodowlane
3. Identyfikacja: biochemiczna, serologiczna, lizotypia
4. Badanie na chemioterapeutyki
5. Badanie serologiczne
6. Próba biologiczna
Identyfikacja serologiczna- opiera się na swoistości reakcji antygenu z przeciwciałem i wykorzystujemy do tego odpowiednie odczyny serologiczne
4. 4) błona komórkowa - rola, funkcje, budowa
Otacza cytoplazmę, zewnętrznie przylega do ściany komórkowej, składa się z fosfolipidów oraz białek. Funkcje: - u bakterii tlenowych transportuje do tlenu elektrony i protony uwolnione w czasie oksydacji substancji odżywczych,- zawiera niektóre enzymy konieczne do syntezy i transportu peptydoglikanu, kwasów teichojowych i zewn komponentów błony cytoplazmatycznej, - wydziela pozakomórkowo enzymy hydrolityczne, - zapewnia w czasie podziału komórki segregacje dna dla kom potomnych, pełni funkcje narządu pobierania i wydalania, uczestniczy w nich czynnie.
5. 5) wyjasnij pojęcia: posocznica bakteremia - bakterie mogą bardzo szybko się rozprzestrzeniać w organizmie z krwią gdzie ich czasowa obecność , przmijająca to bakteremia”transport” bakterii . Jeżeli one się rozmnażają i utrzymują we krwii powstaje posocznica czyli zakażenie krwii. choroba zakaźna i choroba zaraźliwa nie zawsze są równoznaczne np. tężec, botulizm są choirobami zakaźnymi bo wywołanymi przez choroby zakaźne lub ich produkty lecz nie są chorobami zaraźliwymi.
IV
1. cel i metody utrwalania preparatów mikroskopowych. jaka rolę pełni alkohol w sporządzaniu preparatu. Bakterie oglądamy w preparatach barwionych różnymi metodami. Niektóre np. Leptospiry oglądamy przyżyciowo. Materiał nanosimy na czyste całe szkiełka podstawowe. Szkiełka należy odtłuścić przez pocieranie mydlem , mydło wycieramy ściereczką, dajemy krople płynu fizjologicznego i ezą rozprowadzamy materiał na szkiełku na jak największej powierzchni. Preparat musi wyschnąć na powietrzu. Musi być matowy.
Utrwalanie preparatu ma na celu przytwierdzanie materiału do szkiełka. Robimy to 3 krotnie przeciągając materiał w płomieniu palnika bądź chemicznie wedle przepisu. Alkohol pełni rolę odbarwiacza w bakteriach które nie związały trwale niebieskiego barwnika. Jest on czynnikiem różnicującym.
2. wyjaśnij pojęcia: fimbrie- różnią się od rzęsek tym że są krótsze i cieńsze oraz liczniejsze i nie skręcone spiralnie, mogą występować u drobnoustrojów urzęsionych jak i pozbawionych rzęsek. Z fimbriami związane są właściwości hemaglutacyjne. Wyróżniamy fimbrie swoiste- hemaglutynacja nie jest hamowana w obecności D-mannozy. Stanowią czynnik chorobotwórczości i umożliwiają adhezje niektórych gat bakterii i nieswoiste- cukier hamuje aglutynacje, permeazy- bakterie przeciwnie niż org zwierzęce nie mogą pobierać stałych składników odżywczych lecz dopiero po ich rozłożeniu na drobnocz związki rozpuszczalne w wodzie. W zw z tym w przypadku występowania w otoczneniu bakterii białek , węglowodanów i lipidów są one przy udziałe enzymów bakteryjnych rozkładane do prostych związków . dopiero wtedy mogą być wchłonięte przez bł cytopl do wnętrza kom bakteryjnej - Przy udziale specjalnych przenoiśników zwanych permeazami , bakterie heterotroficzne- cudzożywne, dostępne jest dla nich jeynie energia zawarta w związkach organicznych wykazują dużo większe wymagania odżywcze, źródłem energii są węglowodany oraz organiczne zw azotowe. Rozróżniamy prototroficzne którym wystarcza jeden prosty zw organiczny oraz auksotroficzne wymagających zw o bardzo skomplikowanej budowie chemicznej. Spośród heterotrofów większość stanowią saprofity. Pozostałe można określić jako pasożyty.
3. co to jest sterylizacja. jak sterylizujemy płyn fizjol. a jak surowicę.
Sterylizacja- wyjaławianie- postępowanie aseptyczne, zabieg mający na celu zabicie wszelkich form drobnoustrojów wakże przetrwalników. Surowice sterylizujemy met mechaniczną a płyn fizjologiczny met termiczną w autoklawie
4. co to jest antygen. jaką metodą serologiczną wykrywamy egzotoksyny.
Antygen- każda substancja rozpoznana przez układ immunologiczny jako obca, wzbudzająca odp tego układu i reagująca swoiście in vivo i in vitro z produktami tej odpowiedzi czyli przeciwciałami i uczulonymi limfocytami T
5.co to jest zjadliwość bakterii i od czego zależy czy jak ją badamy
Zjadliwość bakterii- terminu zjadliwość używa się do określenia chorobotwórczości drobnoustrojów. Drobnoustrój o zmniejszonej zjadliwości to drobnoustrój atenuowany
Próba ilościowa - określenie zjadliwości zarazka polega na zakażeniu grup zwierząt wzrastającymi rozcieńczeniami zawiesiny badanego mikroorganizmu, a jego stopień zjadliwości określa najmniejsza dawka zarazka powodująca u 50% zakażonych zwierząt chorobę (ID50 - infekcyjna dawka) lub zejście śmiertelne (LD50 - śmiertelna, letalna dawka).