Spektrofotometria: -absorpcyjna-jest związana ze zwiekszaniem energii układu w wyniku pochłaniania energii -emisyjna-wystepuje zjawisko zmniejszania energii układu w wyniku emitowania promieniowania Absorpcja promieniowania w zakresie uv-vis zwiazana jest z przejsciem elektr walencyjnych na wolny orbital o wyższej energii Promieniowanie mechaniczne padajace na probe Io- czesc ulega rozproszeniu, absorpcji Ia, a czesc przechodzi przez probe. Io=It+Ia+Ik I prawo lamberta Ik= T*Io T=Ik/Io Ik-swiatło przechodzące przez próbe, Io-swiatło padające na r-r T-przepuszczalnosc=transmisja Jesli na probe pada promieniowanie monochromatyczne o jednej dł fali to natezenie promieniowania przechodzacego jest proporcjonalne do padającego. II prawo lamberta -dIo/Ik=k*dI log Io/Ik=A d-zmiana I-gestosc warstwy k-wspólczynnik proporcjonalnosci A- absorpcja Jesli na probe pada promieniowanie o dł światła mono to jego nateżenie jest wprost proporcjonalne do grubosci warstwy r-ru. Prawo Lamberta-beera A=log Io/Ik= E*c*l c-stez substancji E- molowy wspólczynnik absorpcji l- grubosc warstwy r-ru Prawo absorpcji- absorbancja wiazki promieniowania monochromat przechodzacego przez r-r jest wprost proporcjonalna do stez roztworu-c i grubosci warstwy absorbancji- l. Monochromatyczność-konkretna dł fali(poprzez widmo elektronowe absorpcji, poprzez pomiar absorbancji dla konkretnej fali) dlugosc swiatła dla r-ru oznacza max absorbancja

Budowa spektro uv-vis-zrodło promieniowania (lampy deuterowe,wolframowo- halogenowe, wysokocisnienowe łukowe lampy kseonowe)-Monochromator-filtry,siatki dyfrakcyjne-kuwety pomiarowe-kwarcowe(najlepsze wyniki), szklane, z tworzyw sztucznych-detektory-fotokomórki,fotopowielacze,fotodiody Cechy spektrofotometru uv-vis-zakres spektralny, spektralna rozdzielczosc,szerokosc spektralna wiązki, dokładnosc skali absorbancji(0,5-0,0008),procentowa zawartosc swiatła rozproszonego(1%-0.00012%) Funkcje ukł komp w spektrofotomertach-przetwarzanie sygnału z analogowego na cyfrowy, diagnostyka przyrzadu,korekta parametrów pomiarowych,sterowanie pomiaru,obliczanie wynikow,obrobka stat pomiariow,magazynowanie danych. Zastosowanie spekt- oznaczanie zwiazkow organicznych zawierajacych grupy funkcyjne (c=o, n=n,c=n,n=o,c=s,c=c), oznaczanie jonów metali w formie bezbarwnych zw kompleksowych, oznaczenie steż barwnych jonów. Czynnosci -wykonanie krzywych wzorcowych -przygotowanie kilku r-row o roznacym steż -wykonanie widma absorpcji-wyznaczenie graf zaleznosci pomiedzy dł fali a absorbancja,max wart absorbancji wyznacza dł promin dla r-ru -wyznaczenie krzywej wzorcowej przy dł fali -wykonanie pomiaru-przed wykonaniem pomiaru nalezy wyzerowac aparat ustawic dł fali -przygotowanie slepej próby-badamy wartosc dla wszystkich odczynników dodanych do próby poza sustancja własc -własciwe pomiary zwiazków-wlewamy r-ry do kuwet i dokonujemy pomiaru absorbancji Spektr IR zastosowanie-identyfikacja zw org, badanie białek,aminokwasow,polipeptydow, cukrów, kwasow nukleinowych, błon kom i składników;oznaczenie sladowych iolości wody w róznych ukł a takze grup -OH Absorpcja promieniowania z zakresu IR wywołuje nie tylko wzbudzenie elektr a takze zmiany energ oscylacyjnej i rotacyjnej. Wynikiem tych drgan sa widma oscylac-rot. Drgania walencyjne-zachodza wzdłuz osi wiazan(zmianie ulegaja dł wiazań-sa skracane lub rozciagane) Drgania deformacyjne-zaginajace-zmianie ulega kąt miedzy wiazaniami; wahadłowe-ruch atomów odbywa sie zgodnie z faza,ale poza płaszczyzna;skręcajace-atomy poruszaja sie poza płaszczyzna,jeden do przodu a drugi do ttyłu Drgania szkieletowe-sa drganiami pierscienia jako całosci zasada oznaczen IR- zwiazki chemiczne w podczerwieni daja charakterystyczne widma na podst których mozna zidentyfikować zwiazek; -wszystkie gr funkcyjne absorbuja promieniowanie w waskim zakresie dł fal nazywane grupowymi dł charakterystycznymi. Zastosowanie IR-do badania czystosci zwiazków chem, do wyjasniania budowy chemicznej w oparciu o znajomosc charakterystycznych dł fali dla gr funkcyjnych zwiazku. Budowa spktr IR -zródło promieniowania(żarzące ciało stałe- włokno nernsta, globar) -kuwety-wszystkie czesci optyczne kuwety musza byc przepuszczalne dla IR, sa zbud z kryształow jonowych, do pracy z r-rami wodnymi stosuje sie kuwety z okienkami wykonanymi z BaCl2,AgCl -detektory- fotodetektory, termiczne Warunki oznaczenia ilosciowego w IR- wybór pasma analitycznego, wybór odpowiedniego rozpuszczalnika, dobieranie odpowiedniego steż probki, eliminacja tła Dobór optymalnych warunków oznaczenia-dobór przyrzadów i jego kalibracja, przygotowanie próbek do pomiaru, wybór analityczny dł fali. Funkcja komp w ir- numeryczna analiza tła,rozdzielenie nakładajacych sie pasm i okreslenie ich parametrów, analiza kształtu pasm.

---