Agata Grygierczyk

numer indeksu: 173616

SPRAWOZDANIE Z ĆWICZEŃ LABORATORYJNYCH Z BIOCHEMII

Temat: Podatność różnych substancji na biodegradacje z wykorzystaniem drobnoustrojów osadu czynnego.

1. Opis ćwiczenia.

1. Zużywanie glukozy przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

Do 4 kolejnych probówek (P) dodajemy 1 ml mikroorganizmów: osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens i drożdże. Następnie do każdej dodajemy 1 ml 1% roztworu glukozy. Do kolejnych 4 probówek (K) dodajemy 1 ml 0,9% roztworu NaCl i 1 ml roztworu glukozy. Wszystkie próby inkubujemy przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we wszystkich próbach wykonujemy próbę Benedicta. Do 8 czystych probówek dodajemy 1 ml odczynnika Benedicta, a następnie po 15 kropel mieszaniny reakcyjnej i wszystkie probówki wstawiamy na 2-3 minuty do wrzącej łaźni wodnej.

2. Badanie aktywności glikozydowej osadu czynnego, osadu czynnego adaptowanego, Pseudomonas flourescens, drożdży.

Do 4 kolejnych probówek (P) dodajemy 1 ml mikroorganizmów: osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens i drożdże. Następnie do każdej dodajemy 1 ml buforu octowego o pH 4,7 i 1 ml 2% roztworu sacharozy. Do kolejnych 4 probówek (K) dodajemy 1 ml buforu octowego o pH 4,7, 1 ml 0,9% roztworu NaCl i 1 ml 2% roztworu sacharozy. Wszystkie próby inkubujemy przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we wszystkich próbach wykonujemy próbę Benedicta. Do 8 czystych probówek dodajemy 1 ml odczynnika Benedicta, a następnie po 15 kropel mieszaniny reakcyjnej i wszystkie probówki wstawiamy na 2-3 minuty do wrzącej łaźni wodnej.

3. Rozkład skrobi przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

Do 4 kolejnych probówek (P) dodajemy 1 ml mikroorganizmów: osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens i drożdże. Następnie do każdej dodajemy 1 ml 0,1% roztworu skrobi. Do kolejnych 4 probówek (K) dodajemy 2 ml 0,9% roztworu NaCl i 1 ml roztworu skrobi. Wszystkie próby inkubujemy przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we wszystkich próbach wykonujemy próbę Benedicta. Do 8 czystych probówek dodajemy 1 ml odczynnika Benedicta, a następnie po 15 kropel mieszaniny reakcyjnej i wszystkie probówki wstawiamy na 2-3 minuty do wrzącej łaźni wodnej. Przygotowujemy także dla każdej z prób sześć rozcieńczeń. Do 6 probówek dodajemy

2 ml wody destylowanej, a następnie do pierwszej probówki 2 ml odpowiedniego inkubatu. Po wymieszaniu, przenosimy 2 ml roztworu do kolejnej probówki itd. W ten sposób uzyskujemy rozcieńczenie 2-, 4-, 8-, 16-, 32- i 64- krotne. Następnie do każdej probówki dodajemy 1 ml 0,01 N roztworu jodu.

2. Wyniki.

1. Zużywanie glukozy przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

	osad czynny	osad czynny adaptowany	Pseudomonas flourescens	drożdże
P	++	++++	++++	++
K	++++	++++	++++	++++

Legenda: im większa ilość plusów tym bardziej czerwone zabarwienie

2. Badanie aktywności glikozydowej osadu czynnego, osadu czynnego adaptowanego, Pseudomonas flourescens, drożdży.

	osad czynny	osad czynny adaptowany	Pseudomonas flourescens	drożdże
P	+	-	-	+
K	-	-	-	-

Legenda: im większa ilość plusów tym bardziej czerwone zabarwienie,

„-” brak zmiany barwy roztworu

3. Rozkład skrobi przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

	osad czynny	osad czynny adaptowany	Pseudomonas flourescens	drożdże
P	-	-	-	-
K	-	-	-	-

Legenda: „-” brak zmiany barwy roztworu

Zarówno dla osadu czynnego, osadu czynnego adaptowanego, Pseudomonas flourescens, drożdży w probówkach z rozcieńczeniem 2, 4 i 8 następuje odbarwienie, o różnej intensywności, roztworu. Zaś w próbach o rozcieńczeniu 16, 32 i 64 nie następuje już odbarwienie roztworu.

3. Wnioski.

1. Zużywanie glukozy przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

Osad czynny i drożdże zużywają więcej glukozy niż osad czynny adaptowany i Pseudomonas flourescen. W środowisku kwaśnym nie następuje rozkład glukozy, dlatego zabarwienie roztworów, po próbie Benedicta, jest intensywnie czerwone. Glukoza jest najbardziej podatna na biodegradację.

2. Badanie aktywności glikozydowej osadu czynnego, osadu czynnego adaptowanego, Pseudomonas flourescens, drożdży.

Drożdże mają większą aktywność glikozydową niż osad czynny. Osad czynny adaptowany i Pseudomonas flourescen nie rozkładają sacharozy. Także w środowisku kwaśnym sacharoza nie ulega rozkładowi. Sacharoza nie jest łatwo podatna na biodegradację.

3. Rozkład skrobi przez osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże.

Czas 20 minut jest niewystarczający by skrobia uległa hydrolizie. Zarówno w środowisku kwaśnym, jak i osad czynny, osad czynny adaptowany, Pseudomonas flourescens, drożdże nie rozkładają skrobi. W poszczególnych rozcieńczeniach następuje ubytek skrobi, zaś przy rozcieńczeniu 16-krotnym, stężenie jest już tak niewielki, że nie następuje odbarwienie roztworu.

---