mrozenie nasienia u bydla sciaga, vet, Andrologia. Ćwiczenia, Ściągi


Mrożenie nasienia u Bo

Rozrzedzalniki:

1. Cytrynianowo-żółtkowo-

glicerolowy

2H2O cytrynian sodu 2,9% 76 ml

fruktoza 1,25 g

glicerol 4 ml

żółtko 20 ml

2. Laktozowo-żółtkowo- glicerolowy

laktoza 76 ml

fruktoza 1,25 g

glicerol 4 ml

żółtko 20 ml

Metody konserwacji nasienia buhaja w niskich temp.:

1. Metoda ampułkowa

2. Cassou (słomkowa)

3. Minitub

4. Kulkowa (japońska)

1. Met. ampułkowa

-pobranie, ocena nasienia

-rozrzedzenie wstępne 1:1

-schłodzenie do temp. pokojowej przez 10 minut

-rozrzedzenie ostateczne: w 1 ml 20mln plemników, po rozmrożeniu zazwyczaj pozostaje 8-10mln plemników o ruchu prawidłowym

-automatyczne napełnienie ampułek i „zatopienie” (w czasie do 10 minut)

-ekwilibracja (przystosowanie) w temp 0-4 ºC - przez 6 godzin

-obniżanie temp. sterowane elektronicznie w tempie:

*10ºC/minutę do 3ºC

*4ºC/minę do -26ºC

*5ºC/minutę do -76ºC/minutę - temp. „suchego lodu”

*zanurzenie ampułek w ciekłym azocie -196ºC

*rozmrażanie: 40ºC/ 50 sekund (łaźnia wodna)

2.Metoda słomkowa

Sporządzenie rozrzedzalnika

-opakowanie (52 g proszku) do 1 cylindra z 400 ml wody 42ºC

-do 2 cylindra 109 ml H2O redestylowanej, 50 ml żółtka, 17 ml glicerolu,podgrzać do 40ºC i rozmieszać

-zawartość obu cylindrów połączyć 1 plus 2 = 576 ml rozrzedzalnika nr 1 z 3% zawartością glicerolu

-z powyższego roztworu pobrać 276 ml płynu i dodać do niego 24 ml glicerolu - (11% rozwór glicerolu - rozrzedzalnik nr 2

-mamy po 300ml 2 rozrzedzalników z 3 i 11% zaw. glicerolu

-rozrzedzalnik 3% służy do rozrzedzenia wstępnego 1:1 lub 1:3

-po 2 minutach rozrzedzenie tym samym do połowy rozrzedzenia końcowego

-schłodzenie roztworu nasienia przez 1 godzinę do 5ºC

-rozrzedzenie ostateczne rozrzedzalnikiem nr 2 z 11% zawartością glicerolu w 3 lub 2 porcjach w odstępach 15 minut tak, aby w 0,25 ml dawki inseminacyjnej było 8-10mln plemników

-ekwilibracja w 5ºC rozrzedzonego nasienie przez 4h

-automat napełnia po 3 słomki

-drugi koniec słomki zamykany ultradźwiękami

-słomki „wędrują” na 9 min do -130ºC (5 cm nad lustrem LN2)

-słomki pakuje się do gobleów i transportuje do kontenerów z LN2

-rozmrażanie- 15 sekund 37ºC

3.Metoda Minitub

-świeży ejakulat na 16 minut do łaźni o temp. 27ºC

-następnie na 5 minut do łaźni o temp. 23ºC

-w tej temp. podajemy rozrzedzalnik nr 1 w objętości równej objętości nasienia, a następnie

-rozrzedzalnik nr 2 w objętości równej objętości rozrzedzalnika nr 1

-Rozrzedzalniki podaje się wolno „pipetując”.

-Porcjowanie i napełnianie minitubek w temp. pokojowej

-pęcherzyk powietrza w środku minituby

-ekwilibracja w temperaturze 5ºC przez 4 godziny

-5 rureczek w 1 koszyczku

-zamrażanie w parach ciekłego azotu -130ºC przez 20min na rusztach 5 cm nad lustrem LN2

-gromadzi się po 300 rurek w pojemniku (goglecie)

-Rozmrażanie -10 sekund w temp. 40 ºC

-Unasiennianie -Pipetą inseminacyjną (pistoletem inseminacyjnym) ze specjalnym zakończeniem uniemożliwiającym wyciśnięcie minituby

4. Metoda kulkowa (japońska)

-rozrzedzenie nasienia 1:1 lub 1:3 np. cyrynianowo-żółkowo-frukozowym lub innym

-ekwilibracja w 4 ºC przez 4-6 godzin

-nakrapianie nasienia na płycie suchego lodu

-objętość kulki 0,25 ml o koncentracji 20-30mln plemników

-po 5 minutach wysypanie drażetek do ciekłego azotu

-kuleczki zbieramy do oznakowanych pojemników i składujemy w kontenerze

-ginie około 50 - 70% plemników

-dawka jest dobra jeśli po rozmrożeniu 30% komórek porusza się ruchem postępowym

-rozmrażanie kulki w 1,2 ml płynu fizjologicznego lub 2,9% cytrynianu sodu

-inseminacja jak przy konserwacji w stanie płynnym -AI tuż lub w czasie owulacji



Wyszukiwarka