LABORATORIUM 6
Temat: PODATNOŚĆ RÓŻNYCH SUBSTANCJI NA BIODEGRADACJE Z WYKORZYSTANIEM DROBOUSTROJÓW OSADU CZYNNEGO
Zadanie 1. Zużywanie glukozy przez osad czynny i czyste szczepy bakterii
Wykonanie:
Przygotować cztery probówki. Następnie dodać do nich:
1 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 1% roztworu glukozy- próba badana
1 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 0,9% roztworu NaCl- próba kontrolna
1 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 1% roztworu glukozy- próba badana
1 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 0,9% roztworu NaCl- próba kontrolna
Próby inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we wszystkich mieszaninach wykonać próbę Benedicta. W tym celu do czterech czystych probówek dodać po 1 ml odczynnika Benedicta i do każdej z nich dodać 0,2 ml mieszaniny reakcyjnej. Probówki umieścić na ok. 1-2 minuty we wrzącej łaźni wodnej. Zanotować wyniki i zinterpretować je.
Zadanie 2. Badanie aktywności glikozydazowej osadu czynnego i czystych szczepów bakterii
Przygotować cztery probówki. Następnie dodać do nich:
1 ml wymieszanego osadu czynnego, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml 2% sacharozy- próba badana
1 ml wymieszanego osadu czynnego, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml wody - próba kontrolna
1 ml zawiesiny bakterii, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml 2% sacharozy- próba badana
1 ml zawiesiny bakterii, 1 ml buforu octanowego o pH 4,7 i 1 ml wody - próba kontrolna
Próby inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie we wszystkich mieszaninach wykonać próbę Benedicta. W tym celu do czterech czystych probówek dodać po 1 ml odczynnika Benedicta i do każdej z nich dodać 0,2 ml mieszaniny reakcyjnej. Probówki umieścić na ok. 1-2 minuty we wrzącej łaźni wodnej. Zanotować wyniki i zinterpretować je.
Zadanie 3. Rozkład skrobi przez osad czynny i czyste szczepy bakterii
Wykonanie:
Przygotować dwie probówki. Następnie dodać do nich:
2 ml wymieszanego osadu czynnego i 1 ml 0,1% roztworu skrobi
2 ml zawiesiny bakterii i 1 ml 0,1% roztworu skrobi
Próby inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie przygotować dla każdej z prób sześć rozcieńczeń. W tym celu dodać do sześciu probówek po 2 ml wody, a następnie do pierwszej przenieść 2 ml odpowiedniego inkubatu, zamieszać, pobrać 2 ml i przenieść do drugiej probówki itd. Rozcieńczając w ten sposób każdą z kolejnych prób uzyskuje się jej rozcieńczenia: 2-, 4-, 8-, 16-, 32- i 64- krotne. Następnie do każdego z rozcieńczeń dodać po 2 ml 0,01 N roztworu jodu.
Na podstawie rozcieńczenia, w którym już nie powstaje niebieskie zabarwienie, określić ubytek skrobi w poszczególnych inkubatach. Wyniki zestawić w tabeli, oznaczając wystąpienie barwy z jodem jako „+”, a brak barwy jako „-`'.