14.03.2011r. |
Kornelia Skrętuła |
Uwagi: |
Gr. C1, OŚ 11.45-15.00 |
Chromatografia kolumnowa i cienkowarstwowa |
Ocena: |
CHROMATOGRAFIA CIENKOWASTWOWA
Cel ćwiczenia:
Celem ćwiczenia jest potwierdzenie przydatności chromatografii cienkowarstwowej do rozdziału barwników roślinnych zawartych w liściach pietruszki oraz rozdział barwników roślinnych zawartych w liściach pietruszki.
Sposób postępowania:
Sporządzono ekstrakt z liści pietruszki: roztarto w moździerzu kilka liści pietruszki a następnie dodano mieszaninę aceton-eter naftowy(w stosunku 1:1)
Za pomocą pipety Pasteura pobrano przygotowany ekstrakt (poprzez watkę) i przeniesiono do fiolki.
Przygotowano kolumnę do rozwijania chromatogramu - wysuszoną i wyłożoną bibułą komorę uzupełniono eluentem składającym się z eteru naftowego-bezwodnego alkoholu etylowego-toluenu (w proporcjach 40:4,5:15)., przykryto nakrywką w celu wysycenia całej komory oparami eluenta.
Za pomocą cieniutkich kapilarek przeniesiono ekstrakt z pietuszki na płytkę pokrytą żelem krzemionkowym:
Zaznaczono linię startu
Naniesiono 2 punkty ekstraktu na lini startu
Płytkę włożono do komory z eluentem w celu rozwinięcia chromatogramu pod wpływem działania sił kapilarnych adsorbentu.
Odczekano aż czoło eluenta zbliży się do końca płytki i wtedy wyjęto ją z komory. Miejsce zatrzymania się eluent zaznaczono ołówkiem jako metę oraz zaznaczono położenie barwnych punktów.
Obliczenia:
f=6,5cm
d1= 2,2 cm d2= 3 cm d3= 3,5 cm d4= 4 cm d5= 4,1 cm d6= 5,8 cm
|
Rf =di/f
Rf1=0,34 Rf2=0,46 Rf3=0,54 Rf4=0,62 Rf5=0,63 Rf6=0,89 |
→ karoten → karoten → chlorofil b → chlorofil a → chlorofil a → ksantofil |
Otrzymana płytka TLC→
Wartość barwników roślinnych dla układu eter naftowy- alkoholu etylowy- toluen (40: 4,5 : 15)
Karoten 0,88
Chlorofil a 0,62
Chlorofil b 0,58
Ksantofile 0,00- 0,47
Wnioski:
Polarność związków rośnie wraz ze spadkiem wartości współczynnika Rf, czyli im mniejsza wartość współczynnika tym większa polarność związku. Z tego wynika, ze najbardziej polarne są ksantofile, następnie chlorofil b, chlorofil a, natomiast najmniej polarne są karoteny.
Jako rozpuszczalnika użyto związek polarny, dlatego też najmniej polarne barwniki zostały wymywane jako pierwsze, natomiast bardziej polarne barwniki wykazują większe powinowactwo do polarnego adsorbentu -żelu krzemionkowego, dlatego zostają wymywane jako ostanie.
Rozpuszczalniki:
Aceton C3H6O
Alkohol etylowy C2H5OH
Toluen C6H5CH3
CHROMATOGRAFIA KOLUMNOWA
Cel ćwiczenia:
Celem ćwiczenia było rozdzielenie mieszaniny ferrocenu i acetyloferrocenu, pomiar ich temperatury topnienia i porównaniem uzyskanych wyników z wartościami tablicowymi oraz uszeregowanie uzyskanych rozpuszczalników wg ich wzrastającej polarności.
Sposób postępowania:
Zamocowana kolumnę do statywu i umieszczono w niej niewielką ilość waty.
Sporządzamy mieszaninę ok.20,0 g Al2O3 i niewielkie ilości cykloheksanu. Wprowadzono tak przygotowaną zawiesinę do kolumny.
Spuszczono kranikiem nadmiar rozpuszczalnika.
Rozpuszczono niewielką ilość mieszaniny ferrocen i acetyloferrocen w cykloheksanie i wprowadzono do kolumny.
Odczekano, aż mieszanina zostanie całkowicie zaabsorbowana i dolano cykloheksanu.
Zebrano do odbieralnika pierwszą frakcję rozdzielonego składnika. Przeniesiono na szalkę Petriego.
Zmieniono rozpuszczalnik na chloroform i zebrano drugą frakcję rozdzielanego składnika. Przeniesiono na szalkę Petriego
Zebrane frakcje odparowano w wyparce, a następnie osad zeskrobano z szalki i przeniesiono do fiolek.
Zmierzono temperaturę topnienia.
Tablicowe temperatury topnienia: Ferrocen: 173°C, Acetyloferrocen: 80-82°C
|
Rozpuszczalniki w kolejności wzrastającej polarności: Cykloheksan Chloroform
|
Zmierzone temperatury topnienia
Frakcja I → ferrocen
Frakcja II → acetyloferrocen
Wnioski: I frakcja to ferrocen, II frakcja to acetyloferrocen
Na polarnej kolumnie (absorbent- tlenek glinu) zaabsorbowany ferrocen jest wymywany jako pierwszy, ponieważ jest mniej polarny niż acetyloferrocen Powinowactwo acetyloferrocen jest większe niż cykloheksanu dlatego pozostaje on w kolumnie i zostaje wymyty dopiero wtedy, gdy zastosuje się bardziej polarny eluent czyli chloroform.
Rozpuszczalniki:
Chloroform CHCl3 : Cykloheksan C6H12:
2