Sylwia Mróz Katarzyna Mikuś Karolina Maćkowska Agnieszka Morawiec Gr. V TŻ

Oznaczanie zawartości białka.

25.03.2014r.

1. Oznaczanie zawartości białka w mleku metodą formylową.

Opis metody: Metoda ta opiera się na reakcji formaldehydu z zasadowymi resztami aminokwasów w białku. Dochodzi do przemiany grup aminowych w nitrylowe z uwolnieniem wodoru, który ulega miareczkowaniu NaOH. Najpierw zobojętnia się grupy
α -aminowe, a po dodaniu roztworu formaldehydu ε -aminowe lizyny. Ilość jonów wodoru uwolniona po dodaniu formaldehydu jest proporcjonalna do zawartości białka. Jako wskaźnika używam fenoloftaleiny.

Wyniki:

V_{NaOH użyta do zobojętnienia α -aminowych grup} = 2,8cm³

V_{NaOH użyta do zobojętnienia ε -aminowych grup lizyny} = 1,5cm³

Obliczenia:

a) zawartość białka ogółem:

X= V_{NaOH użyta do zobojętnienia ε -aminowych grup lizyny} ∙ 1,92

X= 1,5 ∙ 1,92

X=2,88 %

b) zawartość kazeiny

X= V_{NaOH użyta do zobojętnienia ε -aminowych grup lizyny} ∙ 1,47

X= 1,5 ∙ 1,47

X= 2,21%

Wnioski: W badanym mleku zawartość białka wynosi 2,88% natomiast kazeiny 2,21%. Zawartość białka kształtuje się pomiędzy 3,2 — 3,6%, więc nasza próbka nie mieści się w średniej. Zawartość białka w mleku nie zależy wyłącznie od poziomu białka w dawce pokarmowej, lecz głównie od równoczesnego podawania krowom pasz wysokoenergetycznych (buraki pastewne, ziemniaki, młode zielonki, sianokiszonki). Wskaźnikiem prawidłowego stosunku białka do energii w dawce jest poziom mocznika w mleku. Oznaczenie zawartości białka w mleku poza tym, że pozwala ocenić jakość produktu może również być wyznacznikiem prawidłowości diety zwierząt.

2, Oznaczanie zawartości białka w soczewicy metodą Kjeldahla

Opis metody: Metoda ta polega na oddestylowaniu azotu z próbki w aparacie
Parnasa -Wagnera pod postacią amoniaku, który w odbieralniku jest wiązany przez kwas (w tym wypadku przez kwas siarkowy (VI)) o znanej objętości. Miareczkując niezwiązany nadmiar kwasu mogę obliczyć ilość azotu, który korzystając z mnożnika białkowego przeliczam na ilość białka.

Dane i wyniki:

Naważka soczewicy =1,0168g/200cm³ roztworu

C_NaOH= 0,1M

V_NaOH= 16cm³

C_H2SO4=0,05M

_{VpoczątkowaH2SO4}= 25cm³

Równania przebiegających reakcji:

Mineralizacja:

(NH₄)₂SO₄ → 2SO₂ + 2H₂O + O₂

COOH

R CH + O₂ → xCO₂ + yH₂O + z NH₃

NH₂

2 NH₃ + H₂SO₄ → (NH₄)₂SO₄

Oddestylowanie:

(NH₄)₂SO₄ + 2NaOH → 2NH₃ ∙ H₂O + Na₂SO₄

H₂SO₄ + 2NH₃ ∙ H₂O → (NH₄)₂SO₄ + 2H₂O

Miareczkowanie:

H₂SO₄ + 2NaOH → 2 Na₂SO₄ + 2H₂O

Fioletowy roztwór→ zielony roztwór

Obliczenia:

_{VzwiązanegoH2SO4}= _{VpoczątkowaH2SO4} - _{VniezwiązanegoH2SO4}

1mol _H2SO4 2mole_NaOH

C_{związanegoH2SO4} ∙ _{VniezwiązanegoH2SO4} C_NaOH ∙ v_NaOH

_{VzwiązanegoH2SO4}=25cm³ -16 cm³

_{VzwiązanegoH2SO4}= 9 cm³

1cm³ związanego 0,05M H₂SO₄ odpowiada 0,0014g azotu (ag_N), więc:

1cm³ H₂SO₄ 0,0014g_N

9cm³ H₂SO₄ x_gN

x_N=0,0126 g

Obliczam zawartość białka:

200cm³ r-ru 1,0150g soczewicy

25cm³ r-ru xg soczewicy

x=0,126g soczewicy

0,126g soczewicy 0,0126g N

100g soczewicy xg N

x= 10 g

X= xgN ∙ 5,7

X=5,838 ∙5,7

X=57%

Wnioski: Zawartość białka wynosi 57% . W badanej próbce zawartość białka jest wyjątkowo wysoka ponieważ średnia zawartość biała w soczewicy wynosi 25%. Podejrzewam, że tak wysoki wynik może wynikać z niedokładnego wyczyszczenia aparatu
Parnasa -Wagnera po oznaczaniu zawartości białka w mleku metodą Kofranyiego.

3. Oznaczanie zawartości białka w mleku metodą Kofranyiego

Opis metody: Metoda ta polega na oddestylowaniu amoniaku z parą wodną bez uprzedniej mineralizacji w aparacie Parnasa -Wagnera. Oznacza się w obecności wskaźnika Taschiro miareczkując tą część kwasu siarkowego (VI) znajdującą się w odbieralniku, która nie została związana z amoniakiem.

Dane i wyniki:

V_mleka=10 cm³

C_NaOH= 0,025M

V_NaOH= 6,5cm³

C_H2SO4=0,0125M

_{VpoczątkowaH2SO4}= 25cm³

Obliczenia:

X= (25- V_NaOH) ∙ 0,191

X= (25- 6,5) ∙ 0,191

X= 3,533%

Wnioski: Zawartość białka w oznaczanym mleku wynos 3,533%. Zawartość białka w tej próbce mleka również mieści się w średniej.

1

---