24.10.2011	Magdalena Fijałkowska
Ćwiczenie 3	Metody rozdziału i ilościowego oznaczania aminokwasów i białek

Ilościowe oznaczanie stężenia aminokwasów metodą ninhydrynową.

Zasada metody: Aminokwasy pod wpływem ninhydryny ulegają utlenieniu poprzez iminokwasy do amoniaku, dwutlenku węgla i aldehydu uboższego o 1 atom węgla. W wyniku kondensacji cząsteczki zredukowanej i utlenionej ninhydryny z amoniakiem powstaje fioletowo-niebieskie zabarwienie, którego natężenie jest proporcjonalne do zawartości azotu α-aminowego aminokwasów.

Absorbancję powstałego zabarwienia odczytuje się przy λ = 570 nm.

Numer próbki badanej: 3

Cbadane =
Cwzorca =	0,05 %
Awzoreca =	0,009%
Abadane =	0,013%

Stężenie substancji badanej: 0,07

Rzeczywiste stężenie substancji: 0,05

Błąd: 40%

Ilościowe oznaczanie białek metodą Lowry'ego

Zasada metody: Metoda ilościowego oznaczania białka wg Lowry'ego i wsp. wykorzystuje czułą reakcję, jaką dają wiązania peptydowe i aminokwasy aromatyczne z odczynnikiem Folina-Ciocalteu'a. Jest kombinacją reakcji biuretowej oraz reakcji między resztami aminokwasów aromatycznych a tym odczynnikiem, w wyniku której powstają barwne (niebieskie) produkty.

Absorbancję powstałego zabarwienia odczytuje się przy λ = 750 nm.

Numer próbki badanej: 11

Stężenie białka [μg/ml]	Absorbancja
0	0
20	0,111
40	0,182
60	0,262
80	0,329
100	0,390

Wykres 1. Krzywa wzorcowa dla roztwór albuminy o stężeniu 100 ug/ml w 0,9% NaCl

Absorbancja próbki badanej: 0,244

Stężenie próbki badanej: 59 μg/ml

Rzeczywiste stężenie próbki badanej: 50 μg/ml

Błąd: 18%

---