ĆWICZENIE IX

Temat : Udział drobnoustrojów w obiegu węgla w przyrodzie c.d.

1. Mikroflora mleka - odczyt i likwidacja hodowli:

Część praktyczna

a). Oznaczanie liczby tlenowych mezofilnych drobnoustrojów w mleku. 

• Liczenie ogólnej liczby drobnoustrojów w mleku oraz liczby drobnoustrojów kwaszących. Kolonie bakterii kwaszących możemy rozpoznać po tym że nastąpiło wokoło nich odbarwienie podłoża. 

• Wyliczanie średnich z 5 płytek.

• Przeliczanie liczby komórek na 1 cm³ mleka.

• Obliczanie % bakterii kwaszących

b). Oznaczanie miana coli - odczytanie wyników

Przy odczytywaniu wyników stwierdzamy obecność lub brak zmian typowych dla pałeczki okrężnicy 

• występowanie gazu w rurkach Durhama

• zakwaszenie pożywki (zmiana barwy z brunatnej na żółtą) - zmętnienie pożywki

Normy polskie:

• ogólna liczba drobnoustrojów do 10⁵ w 1 cm³ mleka

• miano coli nie mniejsze niż 0,1

c) próba reduktazowa wg Pescha i Sztmmerta - oznaczanie stopnia zakażenia mleka bakteriami.

Do 10 cm³ dobrze wymieszanego mleka dodać 1 cm³ 0,005% wodnego roztworu rezuzaryny. Probówki zatkać jałowym korkiem gumowym i po dokładnym wymieszaniu wstawić do łaźni wodnej do temp. 37^o C. Po określonym czasie obserwuje się zmiany zabarwienia. W miarę redukcji rezuzaryny barwa mleka zmienia się z niebieskiej na liliową, różową, a następnie białą. Stosuje się próbę reduktazową 1 - h, 3 - h oraz 10 minutową. 10 - cio minutowa próba stosowana jest przy klasyfikacji mleka przyjmowanego do mleczarni.

Ocena mleka	Liczebność drobnoustrojów w 1 cm^3 mleka	Odbarwienie błękitu metylenowego	Zabarwienie mleka z resuzaryn
B. dobre	< 10^5	5,5 - 7 h	Stalowoniebieskie
Średnie	5x10^5 - 4x10^6	5,5 2 h	Niebieskofioletowe
Złe	4 - 20x10^6	2 h - 20 min	Różowofioletowe
B.złe	>20x10^6	< 20 min	Bezbarwne

d) Obserwacja mikroskopowa preparatów ze skrzepem w celu zapoznania się z mikroflorą mleka tzw "zsiadłego" 

Każda para wykonuje preparat barwiony met. Grama ze skrzepu mleka zsiadłego świeżego i starego oraz przeprowadza obserwacje drobnoustrojów (jakie formy występują, jaka jest ich liczebność)

2. Mikroflora kiszonek - ocena kiszoneki z kapusty

Część praktyczna

a). Pomiar pH kiszonki z kapusty

b). Obserwacja mikroskopowa mikroflory kiszonki w preparacie barwionym metodą Grama (pow. 1250x) - opis i rysunek

Jakie formy bakterii występują: jakie mają kształty, czy są gram⁺ czy gram¯  oraz ich liczebność. 

c). Oznaczenie miana bakterii gnilnych w kiszonce (miana siarkowodoru) - odczytanie wyników z poprzedniego ćwiczenia. 

W przypadku gdy w kiszonce znajdują się bakterie gnilne to na skutek zachodzących przy ich udziale procesów następuje wydzielanie siarkowodoru. Siarkowodór łączy się z octanem ołowiu na skutek czego powstaje czarny osad siarczku ołowiu.

Rozcieńczenie	Ilość soku z kiszonki w pożywce w ml	Czy występuje osad PbS na bibułce nasączonej Pb(COOH)2
10^-2	0,01
10^-3	0,001
10^-4	0,0001
10^-5	0,00001
10^-6	0,000001
10^-7	0,0000001
10^-8	0,00000001
10^-9	0,000000001

3. Drobnoustroje amylolityczne - odczytanie i opis wyników doświadczenia.

Część praktyczna

• Liczenie ogólnej liczby wyrosłych kolonii

• Zalanie płytek płynem Lugola dla zidentyfikowania koloni drobnoustrojów rozkładających skrobię. Na powierzchnię podłoża wylewamy płyn Lugola, w celu odróżnienia kolonii bakterii amylolitycznych. Skrobia z płynem Lugola zabarwia się na granatowo. Wokół drobnoustrojów amylolitycznych powstają strefy nie zabarwione. (We wniosku wyjaśnić mechanizm powstawania stref niezabarwionych.)

• Liczenie liczby kolonii drobnoustrojów amylolitycznych

• Wyliczenie % drobnoustrojów rozkładających skrobię.

Literatura wykorzystana przy opracowaniu ćwiczenia VIII i IX

• Chruściak E., Kulińska D., Romanowska J., Russel S. - Ćwiczenia z mikrobiologii. SGGW

• Duszkiewicz - Reinhard W. i inni - Teoria i ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej i technicznej. Wydawnictwo SGGW.

• Gołębiowska J. - Mikrobiologia rolnicza - Państwowe wydawnictwo Rolnicze i Leśne. Warszawa.

• Gostkowska K. i inni - Przewodnik do ćwiczeń z mikrobiologii dla studentów Wydziału Rolniczego. - Wydawnictwo AR w Lublinie

• Kunicki - Goldfinger W. - Życie bakterii.

• Nowak A. i inni - Przewodnik do ćwiczeń z mikrobiologii. - Wydawnictwo AR w Szczecinie.

• Różalski A. - Ćwiczenia z mikrobiologii ogólnej. Wydawnictwo Uniw. Łódzkiego

• Schlegel H. G. - Mikrobiologia ogólna. Wydawnictwo Naukowe PWN.

• Zmysłowska I. - Mikrobiologia ogólna i środowiskowa. Teoria i ćwiczenia. - Wydawnictwo UWM Olsztyn

Copyright © 2001-2002

S. Russel, D. Jabłońska-Gorzała, G. Gorzała.

Webmaster: G. Gorzała

---