Przemysław Kraska gr. III

Wpływ czynników na aktywność fosfatazy kwaśnej.

1. Wpływ stężenia enzymu

Wykonanie:

Bierzemy 5 probówek, każda z następującą ilością enzymu: 0,25ml, 0,5ml, 0,75ml, 1ml, 1,25ml. Następnie dopełniamy każdą z probówek wodą do pojemności 1,25ml i dodajemy 0,5ml buforu cytrynowego. Wstawiamy wszystkie probówki na 5 minut do łaźni parowej ustawionej na temperaturę 38°C. Po 5 minutach dodajemy do probówek w odpowiedniej kolejności po 0,5ml 4-nitro-fenylo-fosforanu, mieszamy i wstawiamy na 10 minut do łaźni parowej (ta sama temperatura co poprzednio). Po odczekaniu 10 minut dodajemy kolejno do probówek po 2,5ml węglanu sodowego, mieszamy i stawiamy do statywu. Następnie dokonujemy pomiaru w fotometrze.

Wyniki:

Nr probówki	1	2	3	4	5
Ilość enzymu	0,25ml	0,5ml	0,75ml	1ml	1,25ml
Wynik pomiaru w fotometrze	0,083	0,165	0,310	0,421	0,493

Wykres

Wnioski:

Im wyższe stężenie enzymu tym wyższa jest szybkość początkowa katalizy.

2. Wpływ pH

Wykonanie:

Do 4 probówek dodajemy po 0,5 ml enzymu. Następnie dodajemy po 0,5 ml wody. Teraz dodajemy po 0,75ml buforu cytrynowego, o różnym pH do każdej probówki. Do pierwszej o pH 3 ;do drugiej o pH 4,4 ;do trzeciej o pH 5,2 ;do czwartej o pH 6,6. Wstawiamy teraz probówki do łaźni (38°C) na 5 minut. Po 5 minutach dodajemy do każdej probówki po 0,5 ml 4-nitro-fenylo-fosforanu, i zostawiamy 10 minut w łaźni. Następnie po upływie tego czasu dodajemy po 2,5ml węglanu wapnia, mieszamy i czekamy na badanie w fotometrze.

Wyniki:

Nr probówki	1	2	3	4
pH	3	4,4	5,2	6,6
Wynik pomiaru w fotometrze	0,021	0,099	0,172	0,120

Wykres

Wnioski:

Każdy enzym ma odpowiednie dla siebie pH działania, dla którego szybkość katalizy jest maksymalna. Jednak odchylenie od wartości nominalnej powoduje spadek aktywności wskutek zmiany jonizacji grup aktywnych w miejscu aktywnym.

Wpływ temperatury

Wykonanie:

Do 3 probówek dodajemy po 5ml enzymu o różnej temperaturze: 0°C, 38°C i 100°C. Następnie dodajemy po 0,5ml wody oraz 0,75ml buforu cytrynowego i podgrzewamy 5 minut w łaźni w temperaturze 38°C.Po tym czasie dodajemy 0,5ml 4-nitro-fenylo-fosforanu i mieszamy. Jedną probówkę zostawiamy przez 10 minut w temperaturze 0°C, a dwie pozostałe na 10 minut wkładamy do łaźni o temperaturze 38°C. Po 10 minutach dodajemy do wszystkich probówek węglan sodowy w ilości 2,5ml.

Wyniki:

Nr probówki	1	2	3
Temperatura	0°C	38°C	100°C
Wynik pomiaru w fotometrze	0,028	0,131	0,030

Wykres

Wnioski:

Wraz ze wzrostem temperatury reakcja ulega przyspieszeniu. Jednak w określonej temperaturze zostaje osiągnięte optimum temperatury, po przekroczeniu którego następuje spadek szybkości reakcji.

3

---