12. Funkcja kazeiny lub BSA w technice Wester Blotting: - blokowanie wolnego miejsca na membranie i zapobieganie niespecyficznemu wiązaniu przeciwciała |
13.Wester Blotting - enzymy markerowe: - peroksydaza chrzanowa, fosfataza zasadowa, oksydaza glukozowa, B-galaktozydaza |
14. Zasada wzmocnienia/indukcji sygnału w WB - przyłączenie znacznika do przeciwciała wtórnego skierowanego przeciw przeciwciału pierwotnemu lub białku A lub G, przeciwciało pierwotne ma wiele miejsc wiązania p. wtórnych co powoduje amplifikację |
15. System regulacji poziomu ekspresji pLysS/E - zapobiega niekorzystnej przedindukcyjnej ekspresji białka, plazmid zawiera gen na lizozym T7 inaktywujący polimerazę T7 RNA, gdy hodowla osiągnie określoną liczbę komórek dodajemy IPTG, który wiąże się z represorem który odłącza się od sekw. Regulatorowej co aktywuje gen powstaje dużo polimerazy T7 u zaczyna się produkcja białka |
16. Oporność komórek bakteryjnych E. coli na ampicylinę dzięki: - wprowadzeniu wektora pGEM mającego gen AmpR dla B-laktamazy |
17. Powstawanie ciałek inkluzyjnych: - związane ze złym składaniem przez chaperony, złą obróbką posttranslacyjną, indukowane nadprodukcją obcych białek, spowodowane ekspresją białek rekombinantowych u E. coli |
18. Auksotroficzne geny markerowe: - His4, Leu1, Ura3, Arg4, Ade1 |
19. Rodzaje etykietek białkowych używanych do ekspresji białek rekombinacyjnych: - His-Tag, GST-Tag, MBP (białko wiążące mannozę), CBC (kalmodulinę), poly-Arg |
20. Usuwanie etykiety z białka fuzyjnego: - proteaza TEV |
21. Ograiczenia w stosowaniu 1,10 fenantroliny w układach buforowych: - chelatuje jony 2-wartościowe, inhibitor metaloproteaz, niekorzystny w przypadku białek wymagających do funkcjonowania jonów metali |
22. Inhibitory proteaz serynowych: - PMSF (inhibicja nieodwracalna, rozp. w alkoh. etyl., leupeptyna, chymostatyna |
23. Czynniki redukujące w buforach do pracy z białkami: - DTT (utrzymywanie w stanie zredukowanym grup SHm redukcja disiarczków - p-merkaptoetanol (redukcja białkowych wiązań disiarczkowych) |
24. Rodzaje i kryteria doboru zw. Buforujących - mieszaniny r-row słabych kwasów lub zasad i ich soli, mieszaniny r-row soli kwasu wieloproteinowego o kilku st. Dysocjacji, nie mogą reagować z produktami, nie mogą być toksyczne, nie mogą wpływać na przebieg pracy |
25. Detektory w chromatografii biomolekuł: - rej zmiany gęstości optycznej, UV, pH, przewodności, ultraspact 2000 |
26. Sephadex to: sito molekularne z dekstranu |
27. Do złoża ze związanym białkiem A wiąże się IgG, a na złożu z poli(U) można wyodr. mRNA |
28. W fotochemicznej metodzie, aktywacja polimeryzacji żelu: Rybloflawina, UV(inicjator), TEMED (katalizator) |
29. Rola sacharozy/glicerolu - zagęszcza i obciąża próbkę, |
30. Rola SDS: - detergent nadaje białkom ujemny ładunek, pozwala na migrację w kierunku katody |
31. Kryteria separacji molekuł w wirowaniu w gradiencie: - badany r-r nakładany jest na gradient stężeń rosnący w kierunku dna, po zwirowaniu cząsteczki osiadają na odpowiednim im gęstościach |
32. Określanie natywnej masy białek: Elektroforeza natywna białek - jest przeciwieństwem elektroforezy w obecności czynników redukujących np. SDS. Próbka nakładana na żel rozpuszcza się w buforze nie powodującym denaturacji zawartych w niej białek. |
33. Enzymy lizujące: bakt(lizozym), drożdże (zymoliaza), roślina (celulaza) |
34. Oddziaływanie ligandów: gr. Alikowe (hydrofobowe) gr. Arylowa ( mieszane) |
35. Oczyszczanie białka z etykietą histydynową: chromatografia powinowactwa na złożu niklowym |
36. Enzymy znacznikowe: - dehydrogenaza mleczanowa (cytosol) - dehydrogenaza bursztynianowa (mitochondrium) |