Mikrobiologia przemysłowa

Ćwiczenie nr 10- Immobilizacja drożdży piekarniczych

Zadanie 1.1 Określenie żywotności i stanu odżywienia drożdży piekarniczych.

Materiały: drożdże piekarnicze, płyn Lugola, błękit metylenowy

A. Żywotność

1. Zawiesić niewielką ilość drożdży w wodzie destylowanej

2. Pobrać kroplę tak przygotowanej zawiesiny i umieścić na szkiełku podstawowym i dodać kroplę błękitu metylenowego. Przykryć szkiełkiem nakrywkowym.

3. Oglądać preparat pod mikroskopem (powiększenie 40x) - komórki martwe barwią się na niebiesko, a żywe pozostają bezbarwne.

1. Stan odżywienia

1. Przenieść kroplę drożdży zawieszonych w wodzie na szkiełko podstawowe i zalać płynem Lugola. Przykryć szkiełkiem nakrywkowym.

2. Oglądać preparat pod mikroskopem (powiększenie 40x) - komórki zawierające glikogen wykazują ciemnobrunatne zabarwienie natomiast jasnożółte zabarwienie komórek świadczy o braku tej substancji zapasowej i tym samym o słabej kondycji badanych mikroorganizmów.

Zadanie 1.2 Mikrokapsułkowanie drożdży piekarniczych w alginianie wapnia.

Materiały: drożdże piekarnicze (porcja 3.75 g), 0.75 bufor MOPS pH 7.8, 4% roztwór alginianu, 1% roztwór CaCl₂, 0.8% BaCl₂, podłoże stymulujące (10% glukoza, 0,01% ekstrakt drożdżowy)

Procedura immobilizacji:

1. Porcję drożdży umieścić w 25 ml podłoża stymulującego i inkubować 15 min. w temperaturze 25⁰C na wytrząsarce.

2. Po upływie tego czasu zawiesinę odwirować - 4000 r.p.m. przez 5 min.

3. Supernatant odrzucić a komórki zawiesić w 18 ml buforu MOPS.

4. Uzyskaną zawiesinę zmieszać z 18 ml roztworu alginianu. Przez 5 min. mieszać bagietką (ciągle).

5. Następnie uzyskaną mieszaninę powoli wkraplać pasterówką do 250 ml roztworu CaCl₂. Pozostawić na 10 min.

6. Utworzoną zawiesinę kuleczek odsączyć wykorzystując lejki Buchnera.

7. Kuleczki umieścić w 110 ml BaCl₂ na 5 min, ponownie odsączyć.

8. Otrzymane mikrokapsułki przemyć wodą destylowaną i osuszyć na ręczniku papierowym.

9. Obserwować pod mikroskopem immobilizowane drożdże.

---