0 Oznaczenie bialek metoda Bradforda, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, materiały


Oznaczenie białek metodą Bradforda

Oznaczenie opiera się na wiązaniu barwnika Coomassie Brilliant Blue 250 do białek.

Barwnik ten, zależnie od pH roztworu, występuje w trzech formach: kationowej (czerwonej), obojętnej (zielonej) i anionowej (niebieskiej).

W warunkach kwaśnych barwnik występuje w formie kationowej, podwójnie protonowanej (Amax = 470 nm). Po związaniu z białkiem (głównie z aminokwasami zasadowymi i aromatycznymi), przechodzi w stabilną formę niebieską (Amax = 595 nm). Dlatego też stężenie białka oznaczane jest przy długości fali 595 nm.

Oznaczenie:

Roztwór białka rozcieńczyć do objętości 800 l (ekstrakty wymagają
nie więcej niż 2 l białka, bardziej rozcieńczone preparaty należy użyć
w większych objętościach: 5-20 l)

Dodać 200 l gotowego odczynnika Bradforda.

Próba ślepa: 800 l H2O + 200 l odczynnika Bradforda

Z pomiaru absorpcji przy 595 nm należy obliczyć stężenie białka:

C [μg/μl] = A595 x b : c

Gdzie:

C - stężenie białka w μg/μl

b - współczynnik wyznaczony z krzywej wzorcowej (tu: 16,2)

c - ilość l białka użyta do oznaczenia



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
0 Cwiczenie 6 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawka
0 Cwiczenie 1 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawka
0 Cwiczenie 3 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawka
cw 5 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw ogolem, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw 4 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw 12 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw 6 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw 7 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
cw 10 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
Wyklad 2, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykłady
cw 14 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
Wyklad 1, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykłady
cw 11 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawy
Wyklad 6, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykłady
Wyklad 9, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykłady
Technika Cyfrowa, biotechnologia inż, sem3, TCiM, egzamin
SPRAWOZDANIE Z LABOLATORIUM Z FIZYKI I BIOFIZYKI cw.5, biotechnologia inż, sem2, FiB, laborki, spraw

więcej podobnych podstron