0 Oznaczenie bialek metoda Bradforda, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, materiały
Oznaczenie białek metodą Bradforda
Oznaczenie opiera się na wiązaniu barwnika Coomassie Brilliant Blue 250 do białek.
Barwnik ten, zależnie od pH roztworu, występuje w trzech formach: kationowej (czerwonej), obojętnej (zielonej) i anionowej (niebieskiej).
W warunkach kwaśnych barwnik występuje w formie kationowej, podwójnie protonowanej (Amax = 470 nm). Po związaniu z białkiem (głównie z aminokwasami zasadowymi i aromatycznymi), przechodzi w stabilną formę niebieską (Amax = 595 nm). Dlatego też stężenie białka oznaczane jest przy długości fali 595 nm.
Roztwór białka rozcieńczyć do objętości 800 l (ekstrakty wymagają
nie więcej niż 2 l białka, bardziej rozcieńczone preparaty należy użyć
w większych objętościach: 5-20 l)
Dodać 200 l gotowego odczynnika Bradforda.
Próba ślepa: 800 l H2O + 200 l odczynnika Bradforda
Z pomiaru absorpcji przy 595 nm należy obliczyć stężenie białka:
C - stężenie białka w μg/μl
b - współczynnik wyznaczony z krzywej wzorcowej (tu: 16,2)
c - ilość l białka użyta do oznaczenia
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
0 Cwiczenie 6 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawka0 Cwiczenie 1 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawka0 Cwiczenie 3 II rok spraw, biotechnologia inż, sem3, BKiIG, laborki, sprawkacw 5 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw ogolem, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw 4 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw 12 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw 6 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw 7 - przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawycw 10 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawyWyklad 2, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykładycw 14 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawyWyklad 1, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykładycw 11 - statystyka przyklad, biotechnologia inż, sem3, BiB, ćwiczenia, zestawyWyklad 6, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykładyWyklad 9, biotechnologia inż, sem3, BiB, wykładyTechnika Cyfrowa, biotechnologia inż, sem3, TCiM, egzaminSPRAWOZDANIE Z LABOLATORIUM Z FIZYKI I BIOFIZYKI cw.5, biotechnologia inż, sem2, FiB, laborki, sprawwięcej podobnych podstron