Wykonanie: Mazurkiewicz Marek i Adrian Orzechowski

Zajęcia 1 11-10-2011

Temat: Właściwości aminokwasów i białek

1. cel:

Poznanie niektórych reakcji charakterystycznych stosowanych w wykrywaniu aminokwasów i białek umożliwiających: odróżnienie wolnych aminokwasów od białek i innych związków organicznych, wykrycie aminokwasu zawierającego grupę hydrosulfidową (-SH), aminokwasów aromatycznych, oraz poznanie niektórych właściwości białek, m.in. zdolności do wytrącania się z roztworu pod wpływem różnych czynników.

2. Ćwiczenie 1 - Reakcja ninhydrynowa

1. cel: Wykrycie w roztworze wolnych aminokwasów.

2. zasada metody: Ninhydryna w wyniku kilkuetapowej reakcji daje w obecności związków posiadających grupę a-karboksylową oraz a-aminową niebieskofioletowy produkt - purpurę Ruhemanna

3. obserwacja: Roztwór w próbówce zawierającej glicynę zabarwił się na fioletowo, w roztworze zawierającym białko wytrąciły się charakterystyczne „kłaczki”.

4. wniosek: Reakcja ninhydrynowa pozwala na odróżnienie białek od aminokwasów. Kłaczki są oznaką denaturacji białka.

3. Ćwiczenie 2 - reakcja ksantoproteinowa

1. cel: Wykrycie aminokwasów zawierających pierścień aromatyczny.

2. zasada metody: Pierścień aromatyczny pod wpływem kwasu azotowego V ulega znitrowaniu. Nitrowe pochodne pierścieni aromatycznych maja mają w środowisku zasadowym zabarwienie pomarańczowe.

3. obserwacja: W próbówce zawierającej białko roztwór zmienił barwę na żółtopomarańczową. W próbówce zawierającej glicynę nie nastąpiła zmiana barwy.

4. wniosek: Reakcja ksantoproteinowa pozwala odróżnić białko zawierające w łańcuchu aminokwasy aromatyczne od aminokwasu nie zawierającego pierścienia aromatycznego.

4. Ćwiczenie 3 - reakcji Fola

1. cel: Wykrycie aminokwasów zawierających grupy hydrosulfidowe.

2. zasada metody: Uwolniona w postaci jonów siarczkowych siarka tworzy z jonami ołowiowymi (II) czarny, nierozpuszczalny osad siarczku ołowiu (II).

Na₂S + (CH₃COOH)₂Pb → 2 CH₃COONa + PbS↓

3. obserwacja: W próbówce zawierającej białko wytrącił się czarny osad. W próbówce zawierającej glicynę nie nastąpiła zmiana barwy.

4. wniosek: Reakcja Fola pozwala odróżnić białko zawierające w łańcuchu aminokwasy z grupą -SH od aminokwasu nie zawierającego siarki.

5. Ćwiczenie 4 - reakcja biuretowa Piotrowskiego

1. cel: Wykrycie wiązania peptydowego.

2. zasada metody: Jony miedzi w środowisku zasadowym tworzą fioletowy kompleks z co najmniej dwoma wiązaniami peptydowymi.

3. obserwacja:W próbówce zawierającej białko nastąpiła zmiana barwy na filetową. W próbówce zawierającej glicynę nie nastąpiła zmiana barwy.

4. wniosek: Reakcja Piotrowskiego pozwala odróżnić białko od aminokwasu.

6. Ćwiczenie 5 - Koagulacja cieplna białka

1. cel: obserwacja koagulacji

2. zasada metody: Białka pod wpływem temperatury ulegają koagulacji.

3. obserwacja:W próbówce zawierającej białko nastąpiło zmętnienie o barwie białej.

4. wniosek: Skoagulowane białka tworzą białe roztwory koloidalne.

7. Ćwiczenie 6 - Wytrącanie białka kwasem.

1. cel: Obserwacja wytrącania białka.

2. zasada metody: Białka pod wpływem kwasu ulegają denaturacji.

3. obserwacja:W próbówce zawierającej białko nastąpiło zmętnienie o barwie białej.

4. wniosek: Zdenaturowane białka tworzą białe roztwory koloidalne.

8. Ćwiczenie 7 - Wytrącanie białka solami metali ciężkich.

1. cel: Obserwacja wytrącania białka.

2. zasada metody: Białka pod wpływem soli metali ciężkich ulegają denaturacji.

3. obserwacja:W próbówce zawierającej białko nastąpiło zmętnienie o barwie białej.

wniosek: Zdenaturowane białka tworzą białe roztwory koloidalne.

9. Ćwiczenie 8 - Wysalanie białka.

1. cel: Obserwacja wysalania białka.

2. zasada metody: Białka pod wpływem soli w dużym stężeniu ulegają wytrąceniu ze względu na zniszczenie otoczki solwatacyjnej. Nie ulega uszkodzeniu struktura białka za sprawą czego proces jest odwracalny.

3. obserwacja:Po dodaniu siarczanu amonowego nastąpiło zmętnienie. Po odfiltrowaniu osadu od cieczy i podgrzaniu cieczy nie powstał osad w niej.

4. wniosek: Białko pod wpływem soli uległo wytrąceniu pozostając w osadzie.

- Grafika na licencji Creative Commons autor: Michał Sobkowski udostępniona pod adresem: http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mechanizm_reakcji_ninhydrynowej.png

Ilustracja 1: Mechanizm reakcji ninhydrynowej

Ilustracja 2: Mechanizm reakcji ksantoproteinowej

---