2

Stała Michaełisa (Km) jest charakterystyczna dla każdego enzymu i określa zależność między stężeniem substratu i szybkością reakcji. W szczególnych warunkach stała ta może opisywać powinowactwo enzymu do danego substratu. Wartość liczbowa Km odpowiada takiemu stężeniu substratu (S), przy którym szybkość reakcji osiąga połowę szybkości maksymalnej (V_max)- Dla większości enzymów wyznaczone wartości Km mieszczą się w przedziale 10'¹    10'⁶M.

Jeśli enzym działa zgodnie ze schematem, którego graficznym obrazem jest zależność przedstawiona na Rys. 1, to możemy wyznaczyć Km dla tego enzymu wykonując pomiary szybkości początkowej (tzn. w stosunkowo krótkim czasie, gdy ilość przekształconego substratu jest proporcjonalna do czasu działania enzymu), przy różnych stężeniach substratu. Jest to szczególnie proste, gdy równanie Michaelisa-Menten przedstawimy w formie odwrotności:

4^ = 4^ +

v V _max V _max

W wyniku tego przekształcenia otrzymujemy równanie Lineweavera-Burka, którego wykresem jest linia prosta (Rys. 2a).

Rys. 2. Graficzne wyznaczenie Km i V_max metodą Lineweavera-Burka i Eadie-Hofstee.

2