histologia wykład1

TECHNIKA HISTOLOGICZNA-mikroskopia świetlna

1)    Pobieranie materiału ok. lcm, dla mikroskopu elektronowego ok. Imm.

2)    Utrwalanie-szybkie uśmiercanie komórki bez zmiany struktury.

Dobry utrwalacz:    a)szybko przenika w głąb tkanki,

b) powoduje szybką koagulację ciał białkowych jednak niezbyt

gwałtownie,

c) jest izotoniczny w stosunku do płynów tkankowych. Utrwalacze proste: kwasy mineralne (azotowy HN03, siarkowy H2S04, chromowy=trójt!enek chromu Cr203, osmowy=czterotlenek osmu 0s04), kwasy organiczne (mrówkowy HCOOH, octowy CH3COOH, trój chlorooctowy CC13COOH, pikrynowy=trójjodofenol) i inne (alkohol etylowy C2II50H, metylowy CH30H, propylowy CH3CII2CH20H, aceton CH3COCH2, formalina CH20, aldehyd szczawiowy OHCCHO), sole metali ciężkich (sub]imat=dwuchlorek rtęci HgC12, sole ołowiu azotani octan, cynku ZnC12).

Utrwalacze złożone:

-utrwalacz Camota(alkohol etylowy, chloroform, kw. octowy lodowaty),

-utrwalacz Bakera (formalina, chlorek wapnia, woda destylow'ana),

-utrwalacz Susa (sublimat, chlorek sodu, woda destylowana),

-utrwalacz Cenkera-Hellyego (dwuchromian potasu, sublimat, kw. octowy lodowaty),

-utrwalacz Buina (kw. pikrynowy, formalina, kw. octowy lodowaty, kw. trichlorooctowy).

3) odwodnienie utrwalonych tkanek: 50-100% alkohole,

4) zatapianie w parafinie: płyny pośrednie>parafina (w matakrylaniy dle ME)^

5) krojenie: mikrotomy saneczkowe, korbowe,

6) nawodnienie: 100-50% alkohole, p<^lefp (ą ‘ZZe^pJj

7) barwienie:    metoda nrogresywnaOrozdłeńczone ^barwniki i barwienie w ciągu

dłuższego czasu 12-24h)=barwienie czyste i selektywne,

metoda regresywna(stężone barwniki i krótki okres barwienia)=nierównomierne barwienie, możliwość przebarwienia,

hematoksvlina(naicześciei stosowana hematoksylina Meyera lub Ehricha), wyciąg z amerykańskiego drzewa ERY...LON CAMPECHIANUM-barwienie jąder komórkowych (czyli substancji kwaśnych) eozynafbarwieni e kwaśne, cytoplazmatyczne)

8) odwodnienie:50-100% alkohole (i) płyny pośrednie,

9) zatapianie preparatu na stale: żele np. glicerożelatyna (glicerol + żelatyna), żywice

np. balsam kanadyjski.

- yyuO^

U-

SCHEMAT: pobieranie żywej tkanki—* pobrany fragment tkanki—* docięte fragmenty tkanki przeznaczonej do utrwalenia —*- utrwalenie np w glutaroaldehydzie—* płukanie tkanki w buforze—* kontrastow'anie (barwienie) tkanki w całości (kontrastowanie w bloku) —> odwadnianie w alkoholach o wzrastającym stężeniu—> pokrycie tkanki niepolimeryzującą żywicą—* zatopienie żywicy (np. w żywicy epoksydowej jak Epon łub Aracid), polimeryzacja w 60°C—* gotowy spolimeryzowany bloczek żywicy—* bloczek żywicy w uchwycie obcięty do krojenia—* krojenie ultracienkie za pomocą nożyka szklanego lub diamentowego, nałożenie skrawków na siateczki miedziane—* kontrastowanie dodatkowe (barwienie) nakrojonych skrawków ultracienkich—* skrawki gotowe do mikroskopowania.

2