histologia wykład6

Specjalne techniki badawcze:

—» Tiaminowa pirófosfataza (marker struktury Golgiego), odczyn kontraktuje’⁵ układ cystern i wakuoli, który jest intensywny w komórkach wydzielniczych i nerwowych. W miejscu lokalizacji enzymu stwierdza się intensywne czarne strąty siarczku ołowiu. —* dehydrogenaza burszynianowa- marker wewnętrznej błony mitochondriałnej. DB odcina od substratu (soli sodowej kwasu bursztynowego) atomy wodoru, które następnie łączą się z solą tetrazolową Nitro TB dając barwne złogi formazann.

—* fosfataza kwaśna-marker lizosomów. W komórkach wątroby lizosoiny układają się głównie w biegunach żółciowych.

Specjalne techniki badawcze: immunohistochemia

(jest to metoda badawcza polegająca na wykrywaniu w komórkach • i tkankach substancji o charakterze antygenowym za pomocą znakowanych przeciwciał). Antygen- jest to substancja zdolna do wywołania produkcji swoistych przeciwciał przez system immunologiczny organizmu (immunogenność) i zdolna do swoistego wiązania wytworzonych przeciwciał i tworzenia z nimi kompleksów (antygenowość). •Przeciwciało-białko należące do klasy immunoglobulin wytwarzane przez system immunologiczny i mające zdolność do swoistego wiązania antygenu. Przeciwciała mogą być poliklonalne i monoklonalne. Przeciwciało znakuje się fluorochromami enzymatycznie, ferrytyna łub zlotem koloidalnym.

Podstawowe typy reakcji immunohistochemiczne:

-bezpośrednia (antygen-znakowane przeciwciało),

-pośrednia (antygen- nie znakowane przed wciało-znakowana antygłobulina)

- z mostkami immunoglobulinowymi i kompleksami enzym-antyenzym (antygen-antyglobulina-kompleks enzym/antyenzym).

Specjalne techniki badawcze: autoradiografia / J'

Autoradi ograli a jest metodą badawczą umożliwiającą lokalizację izotopów promieniotwórczych lub znakowanych nimi substanciamiw komórkach lub tkankach. Podana In vivo substancje promieniotwórcze (np tryt) zostają włączone w normalny ciąg procesów metabolicznych. Po przygotowaniu preparatu mikroskopowego w sposób typowy pokrywa się je żelem zawierającym AgBr. Promieniowanie powoduje rozpad tej soli i pojawienie się metalicznego srebra, które po wywołaniu i utrwaleniu można obserwować w mikroskopie.

Metoda ta pozwala na śledzenie dynamiki procesów metabolicznych w komórkach i tkankach.

Specjalne techniki badawcze: cytometria przepływowa

Jest to technika pomiarów właściwości fizycznych i chemicznych komórek z zastosowaniem przyrządu, który w krótkim czasie (paru minut) może ^przebadać komórki liczone w milionach. Badane komórki muszą być zawieszone W płynnym środowisku jako zawiesina oddzielnych komórek. Komórki używane do tych badań są uprzednio zabarwione > barwnikami fluorescencyjnymi. Istnieje cała grupa odczynników fluorescencyjnych, które swoiście wiążą się z takimi składnikami komórki jak DNA czy RNA., ctu ■0OL^C/^riJ^ tufe- \sQfe~

W chwili przepływu przez rejoiv pomiaru komórka przechodzi przez wąski promień światła (zazwyczaj lasera agarowego), który: