DSC06

_c badanym w teście Amesa mutagencm nie są naprawiane i wszystkie mutacje punktowe są widoczne fenotypowo.

2. Mutanty posiadają delckty w budowie lipopolisacharydu (LPS) co pozwala na łatwiejszą penetrację związków chemicznych do wnętrza komórki w porównaniu i dzikim szczepem.

Podłoże minimalne używane do testu zawiera śladowe ilości histydyny dodawane tylko do tzw. to-p-agaru, tworzącego wierzchnią warstwę agaru. Tc śladowe ilości histvdvny są konieczne, ponieważ niektóre mutageny działają tylko na replikujące DNA. Kiedy mutanty A mesa są wysiewane na takie podłoże, rosną tylko dotąd dokąd nie wyczerpią histydyny (2 - 3 podziały komórkowe trwające ok. wl godziny) i tworzą ledwie widoczne zmętnienie w miękkim agarze W przeciwieństwie do nich rewertanty tworzą duże kolonie, ponieważ ich wzrost nic jest limitowany ilością histydyny w podłożu.

Wiele związków chemicznych występujących¹ w przyrodzie nie jest mutagenna dopóki nic zostanie skonsumowana przez zwierzę (lub człowieka). Jedną z przyczyn jest fakt, żc w wątrobie w procesie detoksykacji niektórych związków chemicznych powstają związki, które są bardzo silnymi mutagenami. Z tego powodu wiele związków badanych w teście Amcs’a powinno być rutynowo mkubowanych z wyciągiem z wątrób)- szczura (frakcja S9) w środow isku tlenowym, aby oksygenazy wątroby „aktywowały” badany związek. Dopiero zaktvwowany związek powinien być stosowany do testu na bakteriach.

W ocenie mutagenności związków za pomocą testu Amcs’a przyjmuje się, że mutagencm jest każdy związek, który indukuje powstanie dwukrotnie większej liczby mutantów (rewertantów) w stosunku do liczby mutantów spontanicznych.

Tab. 1. Działanie niektórych mutagenów chemicznych i fizycznych.

Mutaęen	Mechanizm działania	Rodzaj mutacji
2-aminopuryna (2-AP) 5-fluorouracyl (5-FU) 5-bromouracyl (5-BU) 5-bromodeoksyurydyna (5-BUdR)	analog adeniny analog uracylu analog ty miny analog tynńny	tranzycje AT-»GC błędy translacji tranzycje AT-»GC tranzycie AT-»GC
hydroksvlamina (NH,OH)	reaguje z cytozyną	tranzycje GC-»AT
nitrozoguanidyna (NTG) etylometanosulfonian (EMS)	depurynizacja depurynizacja	tranzycje, transwersje, delecie tranzycie, transwersje
kwas azotawy (HN02)	deaminacja zasad	tranzycje, delecie, wiązania poprzeczne, prawdopodobnie transwersie
barwniki akrydynowe	interkalacja	delecie, insercie - przesunięcie fazy odczytu
promieniowanie UV	dimeryzacja pirymidyn, hydratacja C i U	tranzycje, delecje, być może insercje i transwersie
promieniowanie jonizujące (np. X)	jonizacja zasad	tranzycje, mutacje chromosomowe