img141 2

próbek gleby na pożywkę agarową wg Fraziera. Posiew wykonać z rozcieńczeń 10~⁵, 10~⁶, 10~⁷;

-    po skrzepnięciu pożywki płytkę umieścić w termostacie, nie odwracając jej. Hodowle inkubować w temp. 26°C w ciągu 7 dni;

-    po okresie inkubacji powierzchnię pożywki zalać nasyconym roztworem siarczanu amonowego, zamknąć płytkę wieczkiem i pozostawić na 5 min, a ewentualny nadmiar płynu ostrożnie odpipetować. Policzyć liczbę kolonii, wokół których powstały strefy przejaśnienia, świadczące o hydrolizie białka. Wynik oznaczenia podać w przeliczeniu na liczbę ww. bakterii w 1 cm³ wody lub 1 g gleby;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Gi'ama.

2.    Oznaczenie miana bakterii amonifikacyjnych:

-    wykonać posiew próbek wody rozcieńczonych w zakresie od 10^-1 do 10~⁷ do pożywki z 3% wodą peptonową, inkubację prowadzić w temp. 26°C w ciągu 7 dni;

-    po okresie inkubacji wykonać obserwacje wzrostu bakterii (zmętnienie, obecność kożucha, osadu), a także oznaczenia odczynu pPI pożywki oraz amoniaku odczynnikiem Nesslera. Do oznaczenia amoniaku użyć porcelanowej płytki z wgłębieniem. O jego obecności świadczy pomarańczowe zabarwienie hodowli w obecności ww. odczynnika. Wzrost bakterii, obecność amoniaku i alkalizacja pożywki do pH ok. 8-9 świadczy o procesie amonifikacji. Wynik oznaczenia podać jako NPL lub miano bakterii amonifikacyjnych;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Grama.

3.    Oznaczenie miana bakterii nitryfikacyjnych faz I i II:

-    wykonać posiew próbek wody rozcieńczonych w zakresie od 10^-1 do 10~⁴ na pożywki mineralne wg Mejlejohna z dodatkiem odpowiednio (NH₄)S0₂ i NaN0₂, inkubację prowadzić w temp. 28°C w ciągu 14 dni - I faza, 21 dni - II faza;

-    po okresie inkubacji wykonać obserwacje wzrostu bakterii. Obecność bakterii nitryfikacyjnych I fazy przyjąć na podstawie stwierdzenia w hodowli azotynów (III) (N-N0₂), a II fazy - azotanów (V) (N-N0₃). Oznaczenie N-N0₂ wykonać odczynnikiem Griessa. O ich obecności świadczy karminowe zabarwienie hodowli. Do oznaczenia N-N0₃ zastosować odczynnik z dwufenyloaminą w stężonym H₂S0₄, po uprzednim rozkładzie w pożywce pozostałych, nie utlenionych N0₂-N, przy użyciu mocznika i kwasu siarkowego. W wyniku obecności azotanów uzyskujemy zabarwienie niebieskie, przechodzące w granatowe. Wynik oznaczenia podać jako NPL lub miano bakterii nitryfikacyjnych faz I i II;

-    z hodowli o reakcji dodatniej wykonać preparaty trwałe i zabarwić metodą Grama.

65