izolacja limfocytow 1

INSTRUKCJA

Izolacja całościowego RNA z limfocytów.

1.    Do osadb limfocytów wyizolowanych wcześniej i przechowywanych w -20 °C, dodać 500 pi TRI rcagcntu_renergicznie wstrząsnąć.

2.    Dodać 200 pl chloroformu, wytrząsać 15 sek. i pozostawić w RT 5 min.

3.    Wirować 10 min, 4 °C, 12 tyś./min. Ostrożnie wyjmować z wirówki, aby nie zmieszać faz.

4.    Przenieść fazę wodną do nowej podpisanej probówki, uważając, aby nie pobrać białka (zanieczyszcza ono RNA i utrudnia dalsze reakcje).

5.    Dodać 250 pl izopropanolu, wstrząsnąć, pozostawić w RT 5 min.

6.    Wirować 10 min, 4 °C, 12 tyś./min.

7.    Odrzucić supematant i osad przemyć 500 pl 75% EtOH dek:, wstrząsnąć.

8.    Wirować 7 min, 4 °C, 12 tyś./min.

9.    Odrzucić supematant i ponownie przemyć 500 pl 75% EtOH depo

10.    Wirować 4 min, 4 °C, 12 tyś./min.

11.    Dobrze wysuszyć i zawiesić w 10 pl HiOdepc-

»