Zdj cie0046

Analiza związków biologicznie czynnych -egzamin 17.06.2008

Imię Nazwisko (DRUKOWANYMI): U^LU/.A.    _

1.    Czym powinna charakteryzować się komórka pomiarowa (kuweta) stosowana w spektrofotometrach UV-Via?

2.    Niżej wymienione grupy funkcyjne podziel na chromofory i auksochromy:

~C1, -CC- CS, COCH₃, -N=N- -OCH3, -NO2, CN0₂, -NH(CH₃), CCH

3.    Spektrofotometria UV-Vis jest najlepszą metodą badania układów znajdujących się w stanie równowagi w rozcieńczonych roztworach. Najbardziej typowym przykładem jest tautomeria ketonowo-enolowa. Na przykładzie acetyloacetonu wyjaśnij krótko zasadę oznaczania zawartości formy ketonowej i enolowej w/w związku. Która z form w/w związku będzie dominować w rozpuszczalnikach polarnych, a która w rozpuszczalnikach niepolamych?

4.    W roztworach rozcieńczonych intensywność fluorescencji jest proporcjonalna do stężenia luminoforu. Gdy stężenie substancji fluoryzującej przekroczy pewną granicę, fluorescencja zaczyna maleć. Jaką nazwę nosi to zjawisko i czym może ono być spowodowane?

5.    Gdy widmo emisji fluoroforu, nazywanego donorem nakłada się na widmo absorpcji innej cząsteczki nazywanej akceptorem występuje wówczas zjawisko bezpromienistej wymiany energii, czego rezultatem jest powrót cząstki donora ze stanu wzbudzonego do stanu podstawowego, zaś cząsteczka akceptora pozostaje w stanie wzbudzonym. Jaką nazwę nosi ten proces, od czego zależy efektywność tego procesu?

6.    Oblicz współczynnik rozdziału dla związku A i B jeśli wiadomo że rozdział prowadzono w układzie faz odwrotnych, jako fazy stacjonarnej użyto żelu krzemionkowego pokrytego oktylowymi łańcuchami węglowodorowymi a fazą ruchomą był 25% roztwór metanolu w wodzie. Detekcję prowadzono przy długości fali 280 nm. Czas retencji związku A wynosił 12,3 min, związku B 16,8. Objętość martwa 2,3 ml szybkość przepływu 1 ml/min.

7.    Wyjaśnij dlaczego do rozdziału białek korzystniej jest używać słabych wymieniaczy jonowych (kationitu bądź amonitu)?

8.    Co rozumiesz pod pojęciem elucji? Jakie znasz rodzaje elucji stosowane w chromatografii?

9.    Dwa białka różniące się masą (odpwiednio 20 kDa i 35 kDa) poddano rozdziałowi na kolumnie wypełnionej żelem Sephadex G-50. W efekcie rozdziału otrzymano jeden sygnał będący mieszaniną obu związków. Wyjaśnij dlaczego?

10.    Czym różni się chromatografia adsorbcyjna od podziałowej?

11.    W warunkach denaturujących dokonano elektroforezy agarozowęj próbki mRNA wyizolowanej z cytoplazmy komórki. Zawierała ona tylko jeden składnik, który przebył na żelu odległość 7 cm. Równoczesna elektroforeza markera masy RNA dała następujące wyniki:

Nr prążka markera	Wielkość [log nt]	Droga migracji na żelu [cm]
1	5	2
2	4	4,5
3	2	10

log nt B logarytm dziesiętny z liczby reszt nukleotydowych

Narysuj wynik takiego eksperymentu (żel) i oszacuj (metodą, którą da się ocenić) wielkość wyizolowanego mRNA iwyrażonej jako liczba reszt nukleotydowych)

12. Z komórki wyizolowano 2 białka, które zidentyfikowano jako białka histonowe H2A i H2B Zaproponuj eksperyment pokazujący, że białka te wykazują powinowactwo (wiążą się) do DNA, I nit RNA. Narysuj efekt takiego eksperymentu.