20110331213

i sprzęt

•    aparat (to elektroforezy poziomej

•    kuchenka mikrofalowi •agaroa

•    bufcrTK

•    bufor obciążający

•    marker długości DNA

•    roztwór bromku etydyny

•    aparat do wizualizacji żeli w świetle UV

^°**^P^owanłe (wszystkie etapy należy wykonywać w rękawiczkach)

L Przygotować 100 mL 2%(w/v) roztworu agarazy w buforze lx TBŁ

2.    Roztwór agarazy podgrzać w kuchenoe mikrofalowej do momentu aż będąc Mwy (ok. 3 min).

3.    Wylać źef do sanek aparatu, umieścić grzebień w żeki i zastawne do zastygraęaa.

4.    Umieścić sanki w aparacie elcfcli ofot etycznym i wypełnić aparat buforem łx TBŁ

5.    Wyjąć grzebień i przepłukać studzienki żelu.

6.    Do dwóch próbek poddanych ESR-PCR (każda z nkh zawiera po 21-22 pL mieszaniny reakcyjnej) dodać po 3 pL buforu obciążającego.

7.    Ma żel nałożyć po 10 pL mieszaniny z każde) próbki i 3 pL markera dkjgaio ONA

8.    Elektroforezę prowadzić przy napadu 100 V przez ok. 70 mnk

9.    Po zakończeniu elektroforezy, żel wybanmć w bromku etydyny pras 10-20 ton*

10.    Źeł zganiony bromkiem etydyny Mfctootnle przcpMać w wodzie.

11.    prążki w żefu alzitomwoć w świetle UV.

12.    Porównać ukfed prążków usypany przy różnych stężeniach matrycy ONA.

Przygotowanie do ćwiczenia 7 Do ćwiczenia należy oparewreć następtfcce zagadnienia:

•    budowę i Masyttacje enzymów,    _ _

•    kinetyka reakcji enzymatycznych (szybkość reakcji enzymatyanych i czymw wppywnpot na

zmianę szybkości reakcji enzymatycznych),__ _ „ .    _

. model H Im Ssa tk ntrn. Wykorzystywanie toonego pnuksztakaria ramwn* rwjiwara Mann (zwanego wykresem Uncwcawa frska) do okreśMrki Kwi    .

•    inhibicja reakcji enzymatycznych: nieodwracalna I odwracalna (hamowań* tamp^ycype • ntefcompetycyjne).

• witaminy jato prełcursory koenzymów,    _

•    katatyczne kwasy nuktonowra: rytocymy i deoksycybOBymy.