20111206131

FOTOSYNTEZA

O: 0,1 M trls-HCI pH 7,2 z dodatkiem 0,4 M sacharozy, 0,1 M MgCI₂, 0,33 mM 2,6-dlchlorofenololndofenol, 1% K₃Fe(CN)₀, 1% K4Fe(CN)₀, 0,5% FeCI₃, kwas askorbinowy

Otrzymywanie osadu wzbogaconego w chloroplasty Odważamy 2 g liścienf ogórkąJ rozcieramy w oziębionym moździerzu. Do roztartej tkanki dodajemy 10*bm® 0,1 M tris-HCJ pH 7,2, zawierającego 0,4 M sacharozę, oraz 0,1 cm³ 0,1 M MgCl2 i ucieramy jeszcze przez chwilę. Homogenat sączymy przez 4 warstwy gazy do oziębionej zlewki, rozdzielamy do dwu plastikowych probówek i po zrównoważeniu probówek na wadze technicznej wirujemy na zimno przez 10 min przy 4000 obrotów. Supernatant wylewamy, a osad w każdej probówce zawieszamy w 1 cm³ 0,1 M tris-HCI pH 7,2, zawierającym 0,4 M sacharozę.

Reakcja Hilla

(a)    Zawiesinę zawierającą chloroplasty przenosimy do dwu probówek szklanych. Do obu probówek dodajemy po 1 cm³1 % ł^Fe(CN)e. Zawartość probówek wstrząsamy i pozostawiamy na 15 min na świetle oraz w ciemności. W tym czasie w parowniczkach przeprowadzamy następujące reakcje:

1 cm³ K3Fe(CN)6 + kropla 0,5% FeCl3 1 cm³ K4Fe(CN)₆ + kropla 0,5% FeCl3

Nie mieszając zawartości parowniczek zapisujemy barwę roztworów. Parowniczki myjemy i przelewamy do nich zawartość probówek pozostawionych poprzednio na świetle oraz w ciemności. Do obu parowniczek dodajemy po kropli 0,5% FeCl3 i nie mieszając zawartości parowniczek zapisujemy wytworzoną barwę.

(b)    Do dwu probówek szklanych dodajemy po 0$ cm³ 0,33 mM 2,6-dichlo-rofenoloindofenolu i po 5 cm³ 0,1 M tris-HCI pH 7,2 z dodatkiem 0,4 M sacharozy. Jedną z probówek owijamy szczelnie folią aluminiową. Do obu probówek dodajemy po 0,1 cm³ zawiesiny chloroplastów. Do trzeciej probówki (kontrolnej) dodajemy 5,3 cm³ 0,1 M tris-HCI pH 7,2 z dodatkiem 0,4 M sacharozy oraz 0,1 cm³ zawiesiny chloroplastów. Po wymieszaniu