CCF20100324002

Ryc.3. Struktura mitochondrium. AJ zdjęcie z mikroskopu elektronowego; B/ Schemat struktury.

WYKONANIE

Materiał:

Świeża wątroba lub serce świni lub szczura Sprzęt:

1.    Homogenizator nożykowy,

2.    Wirówka Sigma - „Sartorius”

Odczynniki:

A.    Bufory do homogenizacji tkanki i izolacji mitochondriów:

1.    lOmM bufor fosforanowy pH 6,7 zawierający: 0,25 M sacharozę, 1,8 mM CaCh i ImM PMSF.

2.    50 mM bufor Tris-HCl pH 7,6 zawierający: 0,32 M sacharozę, 25 mM KC1, i 4 mM CaCl₂,

3.    50 mM bufor Tris-HCl pH 7,6

B.    Roztwory do oznaczania aktywności dehydrogenazy bursztynianowej:

1.    100 mM bufor fosforanowy pH 7,4

2.    25mM bursztynian w 100 mM buforze fosforanowym pH 7,4

3.    0,4% roztwór chlorku jodo-nitro-tetrazoliowego (INT)

4.    5% kwas trój chlorooctowy (TCA) w mieszaninie octan etylu/etanol (1:1)

C.    Odczynnik Bradford do oznaczania stężenia białka.