img031 (3)

etanol

paliwo

chemikalia

produkty biotechnologiczne farmaceutyki

2.    Cel ćwiczenia

'    •W.--.."

.i-Celem ćwiczenia jest poznanie dwóch podstawowych kierunków biokonwersji materiałów celulozowych:

-    biosyntezy enzymów celulolitycznych i białka mikrobiologicznego (SCP i MBP)

-    enzymatycznej hydrolizy odpadów celulozowych.

3.    Ząkres ćwiczenia

•    biosynteza enzymów celulolitycznych na podłożach zawierających odpady celulozowe oraz oznaczanie aktywności endo-l,4*p-glukanazy w płynach pohodowlanych

•    enzymatyczne scukrzanie pyłu bawełnianego oraz odpadów po produkcji ekstraktów kawy

•    fermentacja etanolowa enzymatycznych hydrolizatów celulozy.

4. Wykonanie ćwiczenia.

4.1. Hodowla pleśni Aspergillus niger na podłożach zawierających:

•    pył bawełniany (statyczne warunki hodowli, czas hodowli 10 dni)

•    celulozę^k^j^^j^^^l^ąy^l^glębna, czas hodowli 5 dni)

Podłoża hodowlane wzbogacono w kiełki słodowe, (źródło azotu), ekstrakt z otrąb pszennych oraz sole mineralne. Po sterylizacji, podłoża zaszczepiono zawiesiną zarodników pleśni Aspergillus niger. Po skończonej hodowli odzielono części stałe podłoża od filtratu, stanowiącego roztwór enzymów celulolitycznych.

MtełioCto

uxO $XU,OcC£X

4.2. Oznaczanie w filtratach z podłoża hodowlanego aktywności endo-1,4-P-glukanazy

4.2.1. Oznaczanie ilości cukrów redukujących obecnych w płynie poho-

dowlanym metodą Somogyi-Nelsona

Do 1 ml płynu pohodowlanego odpowiednio rozcieńczonego dodać lipl odczynnika miedziowego i gotować we wrzącej łaźni wodnej przez 10 minut Po ostudzeniu dodać lml odczynnika Nelsona, wymieszać i odczytać absorbancję na kolorymetrze. Specol przy długości fali 520nm.

Zawartość cukrów redukujących wyliczyć ze wzoru:

gdzie.

C = 0,3234 x E x R =5St)

C - ilość cukrów redukujących [ |iMAml]

E - absorbancja

R - rozcieńczenie płynu pohodowlanego

0,3234 - przelicznik wynikający z krzywej wzorcowej wykonanej dla glukozy

4.2.2. Oznaczanie aktywności endo-l,4-p-glu£anazy na podstawie ilości cukrów redukujących uwolnionych z CM-celulozy (metodą Somagyi-

Nelsona)

Warunki prowadzenia reakcjj:

substrat: 0,4% roztwór CM-celulozy w buforze octanowym 0,05M p pH 4,4. Mieszanina reakcyjna:

do 0,5 ml odpowiednio rozcieńczonego filtratu dodać 0,5 ml roztworu CM- celulozy i próbę inkubować w temperaturze jfcb°C przez 15 minut. Po skończonej inkubacji do każdej próby dodać po 1 ml odczynnika miedziowego i dalej prowadzić oznaczenia zgodnie z metodą Somogyi-Nelsona (p.4.2.1).

Aktywność endo-1,4-P-glukanazy podać stosując wzór:

(0,3234 x£’x7?x2)-C Uuu.

gdzie:

A- aktywność endo-l,4-p-glukanazy [J/ml]

E- absorbancja przy długości fali 520 nm R- rozcieńczenie filtratu

C- ilość cukrów redukujących w filtracie [pM/ml] t- czas inkubacji [min]