na studia1 (11)

Wprowadzenie DNA do komórek roślinnych

1.    metoda fuzji i elektrofuzji .

2.    bezpośrednie wprowadzenie DNA stymulowane efektorami chemicznymi

3.    za pomocą liposomów

4.    metoda elektroporacji

5.    mikroiniekcji

6.    metoda infiltracji

7.    metoda wstrzeliwania - bombardowania

8.    za pomocą wektorów typu A.tumefaciens, A.rhizogenes

9.    przy użyciu silikonowanych włókien węglanowych

Wprowadzanie DNA do komórek

1.    w postaci fosforanu wapnia do linii komórkowych

2.    metoda z zastosowaniem poJikatiónów (Polibren), jonitcwanego dekstranu

3.    metoda elektroporacji

4.    za pomocą liposomów

5.    mikroiniekcji

6.    metoda wstrzeliwania - bombardowania

AMV reverse transcriptase

Avian Myeioblastosis Yirus

Enzym składa się z 2 podjednostek: a (62 kdal) i (3 (94 kdai) i jest oczyszczony z AMV-infekowanych kurcząt. Podjednostka a pochodzi z podjedn ostki p i tworzy się w wyniku proteolizy dając a, p dimer, który jest najbardziej aktywną formą enzymu zarówno m vitro jak in vivo. Podczas izolacji podjednostka fl ulega czasami większej proteolizie co prowadzi do inaktywacji enzymu.

Wykazuje duże powinowactwo do primerowego tRNA i aktywność RNAzyH

M-MUŁV reyerse transcriiiotase Moloney Murine Leukemia Yirus

Enzym składa się z jednej podjednositki © e.cz.71 000 dałtonów.Wymaga Mg²⁺ dla optymalniej aktywności. Odwrotna transkryptaza jest produktem genu virusapoi i jest sklonowana pod postacią białka fitzyjnego izolowanego z E.coli.

Syntetyzuje cDNA z bardzo dużych mRNA Kompleks z primerowym tRNA jest trudny do wy izolowani a. Wykazuje mniejszą aktywność RN Azy H

Zastosowanie odwrotnych transkryptaz

1.    Synteza cDNA ^

2.    Wypełnienie i znakowanie 3'końców

3.    Sekwencjonowanie DNA

4.    Amplifikacja RNA