Obraz2

g. Z każdej pobranej porcji wycieku pobrać po dwie próbki o obj.50pl i dodać do probówek z przygotowanym odczynnikiem DNS.

Próba ślepa (odnośnik) - 50jal roztworu substratu plus 2,0 ml odczynnika DNS

Próba kontrolna - pobrać dwie próbki po 50pl 0,2 M roztworu glukozy, przyjąć ją jako

100 % hydrolizy substratu (wyjaśnić dlaczego?).

Do wszystkich prób dodać po 950 ul wody (celem uzupełnienia objętości) i wstawić do łaźni wodnej o temp. 95°C na 10 min.

Ochłodzić próbki i dokonać pomiaru spektrofotometrycznego przy fali o długości 540 nrn wobec próby ślepej.

3. Opracowanie wyników

1.    Przedstawić w tabeli zależność przepływu roztworu substratu od ustawienia pompy od „10” do „2”

2.    Przedstawić w tabeli zależność szybkości hydrolizy sacharozy w temp. 37° C od szybkości przepływu substratu przez kolumnę (podać średnie wartości absorbancji dla prób. względny stopień hydrolizy (%)).

3.    Przedstawić na wykresie zależność względnej szybkości hydrolizy sacharozy od czasu przebywania ( szybkości przepływu substratu przez kolumnę) , wyznaczyć czas przebywania (szybkość przepływu) przy którym 90 % substratu ulega hydrolizie.

Kozakiewicz A, Neumann P, Banach M, Komoszyński M, Wojtczak A. (2008). Modeling studies of potato nucleoside triphosphate dśphosphohydrolase NTPDasel: an insight int the catalytic mechanism. Acta Biochim Pol. li: 18335113