IMG 1404014729

niósł jednak skutek: ureazę wvkrvstaliz<^^ji^a^i^ roku, a osią& • uhonorowano Nagrodą Noblą w 194& T‘ąĘyJklc6%ą podzielił się to pem i Stanleyem. Osiągnięciem North^o.p% była krystalizacja p⁰^⁰-a Stanleya - uzyskanie po raz pię;ęwaf|p| kryszta|^^Jwirusa helika^-TMV, w 1935 roku. Krystalizację wirusa sferycznego! TBS^, przeprow h ' w 1938; Bawden    uzKsk^^^⁰ raz pierwszy

frakcję projpnieiSowamarentgenowsldegiS^Ilatni^^Sj- w laboratorium a*

bury‘ego, jiźpwąjąe formy włóknistej, a w laboratorium Bemala, wyk_0rJ" stując,^^^^r^sztdly. W ^^^1937, młody Maże^O^^^gyybrał za temat cy doktorskiej ^^^o^i^fcaji^g dyfrął?€j| nrołhi^^^^^ia ■ rentgenowi. w^^iSw^naezenia struktury hemo^ld^^^Bj

Zaledwie 2 lata później, na wscMo.da^^^iii^^^S^loil^iTadeus/ Ba^.

z krystalografem

iLudwildemSME^MM^^planoiyaMck badania dyfrakcyjne.

Białko do krystalizacji powinno być czyste co najmniej w 95%

temperaturze

-70°C, ale po podzieleniu próbki na małe alikwoty do jednorazowego zużycia. B ia łk a nie w olno wiel okr o tnie z amr aż ać i rozmrażać! W roztworze białka zwykle koriiećzny fest* bufórATmi^^am^^^aięg^^^iz^ie^^l^^ j tek azydku sodu NaN3 zapobiegający rozwojowi mikroorganizmów.

analogicznie dla słabej

Zasady. Majpoptularniejsze bufory to:

z użycia i bardzo trujący kakodylanowy, fosforanowy oraz cała gama bufo-rów organicznych, np. Hep es,

nowy, gdyż żę S^zM|duf na trójstopniową dysocjację kwasu ortofosforowego można go nastawić w bardzo szerokim zakresie ;p^||^^^fe3v]eęlnak jdsf oli^J często niewygodny, gdyż fosf^jM^e^^oako^^^^^teiośttB sprzyjającym rozbojowi mikroorganizmów oraz ogrąjnkMstosowaiue wielu kationów metali jako dodatkó\^go krystalizacji, gdyż tworzy z iubu nierozpuszczalne sole.

Powszechną operacją przedkrystalizacyjną jest wymiana buforu. Możemy to osiągnąć, używając wirdwffl>wych filtrów z błoną półprzepusz-czalną, w których przepłukujemjaroztwór nowym buforem, czy też stosując uciążliwą dializę lub wykorzystujjąc odsalającą kolumnę chromatograficzną. Jeśli roztwór białka należy zatężyć, możemy posłużyć się koncentratorem z błoną półprzepuszczalną, albo z użyciem wirówki jak wyżej, albo stosując

■n

H

H

wtim

poiu^,af ^

poztwór b białka wy^;

służy^p

fiolede pi

ę§jp£ jest¹

częściej v

|||H3

280 nm. | cji białka mieniow

wierając

wzakre

Bradfoi

ford w osocza

■