skanuj0010 (91)

Redukcyjne aminowanie a-oksokwasów

O

OH NH, ,

NaBH₄ O

J

W roztworze kwasowym, czyli przy niskim pH, cząsteczka aminokwasu jest protonowana i występuje głównie jako kation. W roztworze zasadowym, przy wysokim pH, aminokwas traci proton i występuje głównie jako anion. Pośrednie pH, przy którym istnieje dokładna równowaga między formą kationową i anionową aminokwasu i występuje on jedynie jako obojętny, dipolowy jon obojnaczy nazywamy punktem izoelektrycznym, p/, aminokwasu.

aJ- -WUI, R 0	H,0^+ R O -OH	R O
pH HgNCHcoH	-— +1 11 _ -— H3NCHCO	= 1 f • HgNCHCO
io omuwoWOA njskjepH ^(protonowany)	PH	wysokie pH
	punkt izoelektryczny	zdeprotonowany
jcyfaoty cfoo^Jmp.	(neutralny jon obojnaczy)

IgL. Na czym polega proces elektroforezy? J tlektroforeza to metoda separacji makrocząsteczek. Pod wpływem przyłożonego napięcia cząsteczki te, obdarzone ładunkiem elektrycznym, wędrują w polu elektrycznym. Prędkość przemieszczania zależy od ładunku makrocząsteczki, jej rozmiaru, kształtu, a także oporów ruchu środowiska. Technika ta jest najczęściej stosowana do rozdzielenia DNA i jego analizy w żelu, a także do rozdzielania RNA czy białek.

Wyróżnia się dwa rodzaje żeli:

żele agarozowe i żele poliakrylamidowe

Aparaty do elektroforezy:

aparat i żel poziomy - żel umieszcza się poziomo; nalewamy do zbiornika odpowiedni bufor i przykładamy napięcie - to wywołuje migrację DNA (ma ładunek ujemny) od elektrody ujemnej (katody) do elektrody dodatniej (anody);

aparat pionowy - stosuje się go głównie do rozdziału w żelach poiiakrylamidowych; żel umieszcza się pionowo; od góry i od dołu żelu są zbiorniki z buforem; kierunek migracji jest od elektrody ujemnej do elektrody dodatniej.

Rozdział elektroforetyczny zależy od kilku czynników: konformacji DNA;