SDC13857

Wysokosprawna chromatografia cieczowa kolumnowa

201

Ni

jg»

H

i\|ch

iatla

ytko

ima-

yciu

^iają i fali z<# ani* a* 0 J#

5#

h#'

nienasycone i grupy chromoforowe w cząsteczce (=C=0, =C=S, —N=N , CH=CH ), np. olefin, związków aromatycznych ibarwmków.

(Obecnie powszechnie stosowane są detektory spektrofotorae-Uyczne, w których możliwa jest płynna regulacja długości fali światła w całym zakresie nadfioletu i jego części widzialnej (190-600 nm). Taki detektor po zatrzymaniu przepływu fazy ruchomej umożliwia rejestrację widma absorpcji substancji znajdującej się w detektorze i ustalenie długości fali, przy której występuje maksimum absorpcji. Można więc wykryć daną substancję z maksymalną czułością.

Wykonując analizę widma UV zawartości komórki pomiarowej detektora — po zatrzymaniu przepływu fazy ruchomej — mierzonego przy co najmniej dwóch długościach fali i wykorzystując stosunek absorbancji \\ ł\i można stwierdzić, ile związków chemicznych znajduje się w detektorze. Na tej podstawie ocenia się przebieg rozdzielania w zastosowanych warunkach chromatografowania i ewentualnie identyfikuje substancje, którym odpowiadają poszczególne piki. Aby detektor UV dobrze działał, użyty eluent nie powinien absorbować światła przy zastosowanej długości fali. Gdy eluentem jest heksan, wówczas detektorem UV można wykrywać wszystkie związki chemiczne, które absorbują światło nadfioletowe o długości fali większej niż 195 nmj Jeżeli eluentem jest chloroform, to możliwa jest detekcja tylko takich związków, które absorbują światło o długości fali powyżej 240 nm.

Detektor U V jest niewrażliwy na zmiany przepływu fazy ruchomej i na zmiany temperatury. Wykrywalność analizowanej substancji przy dobrze dobranej długości fali nadfioletu wynosi średnio ok. 1 ngwjióhce.------ :---..

[Niektóre firmy produkują detektory z matrycą fotodiodową (ang. diodę array detector — DAD). Schemat układu optycznego takiego detektora przedstawiono na rys. 3.20. Światło z lampy dei^te-ttwej jest skupiane przez układ optyczny w komórce przepływowej, * której część światła jest absorbowana przez wykrywane substan-cjc chromatografowane. Następnie promień światła rozszczepiony ⁿi$iątęe dyfrakcyjnej pada na matrycę diodową. Diody z tej ma-Jęcy mogą rejestrować intensywność światła w zakresie 190-600 nm