Jwaga! Ekstrakt na szkiełku zegarkowym pozostawić do dalszej analizy! (Metoda spektrofotometryczna w zakresie UV)
> cbromatogram rozwijać (ok. 1,5-2 godz.) do wysokości min. 15 cm w komorze chromatograficznej w mieszaninie rozpuszczalników: toluen:dioksan:etanol:amoniak 25% (50:4(h5:5) i wysuszyć.
> wywoływanie chromatogramu:
spryskać: a) roztworem Dragendorffa - widać pomarańczowe plamy morfiny, kodeiny, kokainy, papaweryny i atropiny,
b) roztworem jodu w kwasie solnym (jod wKJ w etanolu + HC1 w etanolu) w celu uwidocznienia ciemnej plamy kofeiny,
> uzyskane barwne plamy i ich Rf porównać ze wzorcami. Kolejność plam od linii stanu jest następująca: II wzorzec: atropina, kodeina, papaweryna, III wzorzec: morfina, kofeina, kokaina.
> w celu potwierdzenia obecności alkaloidów w moczu należy wykonać badanie ich widm w zakresie ultrafioletu.
3. Metoda spektrofotometrii w zakresie ultrafioletu
> suchą pozostałość na szkiełku zegarkowym rozpuścić w 1 ml etanolu i rozcieńczyć otrzymany roztwór 100-200-krotnie 0,2 N kwasem siarkowym,
> widmo badanego roztworu należy zdejmować na spektrofotometrze Cary 1 w zakresie 220-320 nm wobec 0,2 N H2SO4 jako odnośnika,
> na podstawie otrzymanego widma dokonać identyfikacji alkaloidu porównując wyniki własne z widmami substancji wzorcowych:
^max | |
kokaina |
230 |
kodeina |
238,285 |
papaweryna |
240 |
atropina |
260 |
kofeina |
273 |
morfina |
290 |