9428
0701 djvu

87

METODY OZNACZANIA HEMOGLOBINY

nadzwyczajnie czystej hemoglobiny. Hemoglobinę taką należy otrzymywać z wyosobnionych z surowicy czerwonych ciałek krwi.

Otrzymywanie hemoglobiny. Możliwie świeżą odwłóknioną krew końską lub bydlęcą centryfugujerny w naczyniach około 200 cm. objętości i po odciągnięciu surowicy dodajemy do ciałek taką samą obiętość 0,9° _a NaCl, następnie centry fugujemy powtórnie; przemywanie takie powtarzamy kilkakrotnie, aż do zupełnego usunięcia surowicy. Przemyte ciałka rozpuszczamy w jak-najmniejszej ilości wody przekroplonej 37°, oziębiamy do 0° i zadajemy połową objętości tak samo oziębionego eteru. Cała manipulacya powinna się odbywać również w temperaturze 0. Otrzymany rozczyn hemoglobiny umieszczamy w lejku rozdzielczym dobrze zamkniętym i kłócimy go kilkakrotnie w ciągu dnia. Na drugi dzień lejek pozostawiamy w spokoju i wskutek tego zawartość jego układa

Eyc. 26.

się w 3 warstwy: dolną przeźroczystą, zawierającą największą cześć hemoglobiny w wodnym rozczynie, średnią — galaretowatą, zawierającą pozostałości ciałek i wreszcie górną, składającą się przeważnie z eteru. Ostrożnie, otwierając kurek, spuszczamy do szklanki przezroczystą warstwę dolną; jak tylko ponad kurkiem ukażą się pierwsze obłoczki osadu natychmiast go zakręcamy i czekamy kilka godzin; gdy się oddzieli nowa warstwa przezroczystego roztworu, zlewamy ją również i następnie zapomocą pompy przepuszczamy przezeń powietrze. Oziębiamy płyn w kolbie do 0° i dodajemy V* objętości czystego oziębionego alkoholu; wstawiamy kolbę do mieszaniny oziębiającej, którą zmieniamy rano i wieczór. Krystalizacya hemoglobiny końskiej kończy się po 12, bydlęcej po 24 godzinach. Druga i trzecia krystalizacya odbywa się bez alkoholu.

Metoda kolorometryczna Hoppe-Seylera. Hoppe-Seyler przygotowuje z najczystszej hemoglobiny roztwór o danym stężeniu n°/₀. Roztwór ten wlewa do hematynometru t. j. naczynia o równoległych ściankach szerokości 1 cm. (ryc. 26). Do drugiego takiego samego