112936

F6 Przeciwciała nioiiokloiialne

1. Przeciwciała monoklonalne

a)    W 1975r. Kohler i Milstein wprowadzili metodę produkcji przeciwciał o określonej swoistości

b)    Powstają w wyniku fuzji komórki nowotworowej szpiczaka z limfocytem B

produkującym przeciwciała o określonej swoistości

c)    Powstają również dzięki wykorzystaniu bibliotek Fv zawierających sekwencje powstałe w wyniku fuzji genów kodujących zmienn części łańcuchów lekkich i ciężkich

2. Uzyskiwanie przeciwciał monoklonalnych - fuzja komórek.

Metoda tradycyjna.

1)    Izolacja antygenu

2)    Immunizacja myszy

3)    Hodowla komórek szpiczaka

4)    Izolacja śledziony immunizowanej myszy

5)    Fuzja komórek śledziony i komórek szpiczaka

6)    Selekcja komórek hybrydoma - komórki nie podlegające fuzji są usuwane - komórki szpiczaka na pożywce HAT, komórki śledziony nie dzielą się

7)    Klonowanie komórek hybiydoma - jedna komórka w jednej studzience

8)    Namnażanie komórek hybrydoma

9)    Synteza przeciwciał monoklonalnych

10)    Oczyszczanie przeciwciał monoklonalnych

3. Typy przeciw ciał monoklonalnych

a)    Mysie przeciwciała monoklonalne

-    Źródło różnych przeciwciał monoklonalnych o dużym powinowactwie i specyficzności

-    Immunogennośc cząsteczki (ograniczone stosowanie w lecznictwie)

b)    Przeciw ciała chimeryczne

-    Przeciwciała człowieka zawierające regiony zmienne myszy

c)    Przeciwciała humanizowane

-    Modyfikacja genetyczna na poziomie DNA poprzez wymianę części stałych łańcucha ciężkiego i lekkiego myszy są zastępowane przez regiony pochodzące od człow ieka. Proces ten całkowicie nie hamuje immunogenności przeciwciała.

-    W drugiej metodzie sekwencjonuje się mysie przeciwciała i wprowadza region hiperzmienny do przeciwciał człowieka

d)    Przeciw ciała prymatyzow ane - zawierają regiony zmienne od makaka

e)    Przeciw ciała człow ieka - zbudowane tylko z regionów przeciwciał człowieka

f)    Całko wicie ludzkie przeciwciała

1)    Fuzia limfocytów B człowieka z komórkami szpiczaka

-    Często przed fuzją trzeba unieśmiertenić limfocyty B przez wprowadzenie np. wirusa Epsteina - Barr

-    Proces trudny, niebezpieczny ze względu na stosowanie wirusów

2)    Uzyskiwanie przeciwciał metodami inżynierii genetycznej - biblioteki Fv

-    Z biblioteki wybiera się różne geny otrzymując pożądane kombinacje

-    Namnażanie w bakteriofagach